способ слияния протопластов растительных клеток

Формула изобретения

Способ слияния протопластов клеток ячменя, включающий использование химического агента и проведение инкубации протопластов после агрегации при 42°С в течение 30 мин, причем в качестве химического агента используют хлористый лантан.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии, и может быть использовано для получения большого количества слившихся протопластов.

Гибридизация соматических клеток - это метод, завоевавший популярность как чрезвычайно мощный экспериментальный прием, который нашел применение в самых разных областях биологической науки. В основе метода лежит искусственно вызванное слияние различных клеток и образование клеточного гибрида (Рингерц Н., Сэвидж Р. Гибридные клетки. М.: Мир. 1979. - 415 с.).

Индукторами слияния являются химические агенты (Lucy J. Membrane Processes: Molecular Biology and Medical Application N Y.Springer. - Verlag. 1984. P.27-48) и электрическое поле (Zimmemiann U. J. Membrane Biol. 1982. - Vol.67. - P.165-182).

Известен способ слияния протопластов с полиэтиленгликолем (Kao K.N., Michaylak М.R. 1974. - Vol.115. - Р.355-367). Однако частота слияния протопластов растительных клеток низка, порядка 0,5-5% (Борнман X. В кн: Биология культивирования клеток и биотехнология растений. М.: Наука. 1991, с.85-95). К тому же полиэтиленгликоль обладает значительной токсичностью.

Задача создания методов с высокой частотой слияния остается актуальной. В нашем случае это достигается способом, который заключается в том, что к протопластам растительных клеток добавляется хлористый лантан до конечной концентрации 5-10 мМ, после агрегации протопласты инкубируют при 42°С в течение 30 мин. Учет слившихся протопластов ведется с помощью светового микроскопа.

Способ осуществляется следующим образом: протопласты ячменя обыкновенного (Hordeum sativum) получают после инкубации с целлюлазой и пектиназой (Бутенко Р.Г. и др. Клеточная инженерия. М.: Высшая школа. 1987. 127 с.). К протопластам добавляли хлористый лантан до конечной концентрации 5-10 мМ. В диапазоне этих концентраций происходит сильная агрегация протопластов. После агрегации протопласты инкубировали при 42°С в течение 30 мин. Учет слившихся клеток проводили с помощью светового микроскопа. Частота слияния протопластов составила 30-50%.