способ микробиологической очистки нефтяных шламов и загрязненного нефтепродуктами грунта (варианты)

Формула изобретения

1. Способ очистки нефтяных шламов и загрязненного нефтепродуктами грунта, включающий внесение иммобилизованной на носитель биомассы нефтеокисляющих микроорганизмов с минеральными удобрениями, отличающийся тем, что в качестве носителя биомассы используют сорбент "Эколан", иммобилизацию биомассы, взятой в концентрации не менее 10 г/л асв, осуществляют инкубированием с сорбентом не менее 1 ч в растворе минерального удобрения, взятого в количестве 2-16 г/л, при рН не более 7,0 в присутствии поливалентных катионов алюминия, вносимых в количестве до 100 мг/л, в качестве нефтеокисляющих микроорганизмов выбирают микроорганизмы с наибольшим показателем гидрофобности клеток и определяют их морфотип колоний, если микроорганизмы имеют S- или М-тип колоний, то их используют для иммобилизации на "Эколане", сорбент с иммобилизованными нефтеокисляющими микроорганизмами вносят в очищаемый грунт или шлам в соотношении 1:1000 по массе соответственно, регулярно перемешивают, поддерживая влажность 60% от предельной влагоемкости и внося минеральные удобрения.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что нефтеокисляющие микроорганизмы выбирают из состава аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры очищаемого объекта.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что нефтеокисляющие микроорганизмы выбирают из состава коллекции нефтеокисляющих микроорганизмов.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что минеральные удобрения вносят с учетом потребности нефтеокисляющих микроорганизмов в биогенных элементах.

5. Способ по п.2 или 3, отличающийся тем, что катионы алюминия вносят в концентрации 51,3 мг/л в составе соли алюминия.

6. Способ очистки нефтяных шламов и загрязненного нефтепродуктами грунта, включающий внесение иммобилизованной на носитель биомассы нефтеокисляющих микроорганизмов с минеральными удобрениями, отличающийся тем, что в качестве носителя биомассы используют сорбент "Эколан", иммобилизацию биомассы, взятой в концентрации не менее 10 г/л асв, осуществляют инкубированием с сорбентом не менее 1 ч в растворе минерального удобрения, взятого в количестве 2-16 г/л, при рН не более 7,0 в присутствии поливалентных катионов алюминия, вносимых в количестве до 100 мг/л, в качестве нефтеокисляющих микроорганизмов выбирают микроорганизмы с наибольшим показателем гидрофобности клеток и определяют их морфотип колоний, если наибольший показатель гидрофобности клеток имеет микроорганизм с R-типом колоний, то отбирают микроорганизм S- или М-типа колоний, имеющий наибольший показатель гидрофобности клеток, микроорганизмы R-типа и выбранного S- или М-типа колоний исследуют на способность деградировать мазут, из них выбирают микроорганизм, деградирующий мазут в наибольшей степени, иммобилизуют его на "Эколан", сорбент с иммобилизованными нефтеокисляющими микроорганизмами вносят в очищаемый грунт или шлам в соотношении 1:1000 по массе соответственно, регулярно перемешивают, поддерживая влажность 60% от предельной влагоемкости и внося минеральные удобрения.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что нефтеокисляющие микроорганизмы выбирают из состава аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры очищаемого объекта.

8. Способ по п.6, отличающийся тем, что нефтеокисляющие микроорганизмы выбирают из состава коллекций нефтеокисляющих микроорганизмов.

9. Способ по п.6, отличающийся тем, что минеральные удобрения вносят с учетом потребности нефтеокисляющих микроорганизмов в биогенных элементах.

10. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что катионы алюминия вносят в концентрации 51,3 мг/л в составе соли алюминия.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области экологии, в частности к способам очистки объектов окружающей среды, загрязненных нефтью и нефтепродуктами с использованием нефтеокисляющих микроорганизмов, вносимых в объект очистки в иммобилизованном на носитель виде.

Загрязнение нефтью и нефтепродуктами окружающей среды является актуальной экологической проблемой современного мира. Решение данной проблемы включает использование метаболического потенциала нефтеокисляющих микроорганизмов. Иммобилизация как способ качественной и количественной модификации свойств биологического агента используется в практике, являясь одновременно предметом микробиологических исследований. Использование закрепленных на носителе нефтеокисляющих микроорганизмов позволяет расширить область применения микробиологического метода ликвидации углеводородных загрязнений. Комбинация сорбционного и микробиологического методов очистки, основанная на подборе носителя-сорбента и условий иммобилизации клеток наиболее активных микроорганизмов - деструкторов нефти, является основой способа, разработанного в рамках данного изобретения.

Известен способ очистки почвы от нефти и нефтепродуктов (патент RU 2128703, МПК В09С 1/10), включающий обработку почвы раствором, содержащим микроорганизмы, предварительно выделенные из взятой с места загрязнения почвы, раздельно наработанные в ферментерах до достижения максимальной концентрации клеток и смешанные в соотношении, соответствующем соотношению изолятов в отобранной с места загрязнения пробе.

Недостатком данного способа является недостаточная его эффективность из-за внесения микроорганизмов-деструкторов в объект очистки в виде суспензий клеток вследствие меньшей устойчивости свободных клеток во внешней среде по сравнению с иммобилизованными на носителе.

Известен способ обработки нефтяного шлама (патент RU 2198747, МПК В09С 1/10), включающий смешивание нефтешлама с чистой почвой и древесными опилками в соотношении 1:2:1, а также внесения микроорганизмов Bacillus sp. ВНИИСХМ 132 и белкового биостимулятора "Биотрин".

Данный способ обработки недостаточно эффективен, так как вносимые в виде суспензии микроорганизмы лишены защитного действия иммобилизации, в частности могут вымываться из очищаемого шлама, поскольку использование большого количества опилок говорит о том, что способность микроорганизма к адгезии на опилках неизвестна.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ очистки почвы от нефти и нефтепродуктов (патент RU 2041172, МПК C02F 3/34), включающий введение в почву бактериальной культуры, а именно природного штамма Mycobacterium sp. ВНИИСХМ 375А в виде суспензии либо иммобилизованного на стерильном органическом субстрате-носителе, например торфе, в смеси с минеральным удобрением.

Недостатком данного способа является нерентабельность его применения в регионах, где стоимость используемого в качестве носителя торфа высока. Кроме того, неизвестна эффективность данного способа при очистке нефтяных шламов и ликвидации загрязнений грунтов нефтепродуктами, содержащими высокомолекулярные биологически устойчивые углеводороды. Использование бактериальной культуры Mycobacterium ВНИИСХМ 375А менее эффективно, поскольку исключает применение аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры, природно-адаптированной к условиям нефтезагрязненного объекта.

Задачей настоящего изобретения является разработка доступного эффективного способа очистки нефтезагрязненного грунта и нефтяного шлама.

Для решения поставленной задачи из объекта загрязнения проводят выделение аборигенных нефтеокисляющих микроорганизмов с использованием общепринятых методов (С.Б.Петрикевич, Е.Н.Кобзев, А.Н.Шкидченко Оценка углеводородокисляющие активности микроорганизмов // Микробиология, 2003. - №1. - С.25-30) либо используют коллекционные штаммы нефтеокисляющих микроорганизмов. Проводят отбор изолятов нефтеокисляющих микроорганизмов с помощью экспресс-методов: определения показателя гидрофобности клеток и морфотипа колоний на плотной питательной среде. В результате отбора находят микроорганизм с наибольшим показателем гидрофобности клеток. Если обладающий наибольшим показателем гидрофобности микроорганизм имеет S- или М-морфотип колоний, то его используют для иммобилизации.

Если обладающие наибольшим показателем гидрофобности штаммы имеют R-морфотип колоний, то их проверяют на способность к деструкции высокомолекулярных углеводородов на жидкой минеральной среде. Для этого микроорганизм культивируют на жидкой минеральной среде (Практикум по микробиологии. / Под ред. Н.С.Егорова. М., 1976. 307 с.), где в качестве источника углерода и энергии используют мазут, а степень деструкции последнего определяют количественно (Сборник методик и инструктивных материалов по определению вредных веществ для контроля источников загрязнения окружающей среды. Часть 5. Методики по определению концентрации загрязняющих веществ в природных и сточных водах // Краснодар. - 1996. - c.128). Степень деструкции мазута измеряют также для одного микроорганизма с S- или М-типом колоний, обладающим наибольшим показателем гидрофобности клеток среди всех микроорганизмов с S- или М-типом колоний. Микроорганизмы R-типа используют для иммобилизации, если они деградируют мазут в большей степени, чем выбранный из S- или М-типа, обладающий наибольшим показателем гидрофобности. В случае меньшей деструкции мазута штаммом R-типа по сравнению с выбранным штаммом S- или М-типа используют последний.

Нефтеокисляющие микроорганизмы получают глубинным культивированием. Проводят адсорбционную иммобилизацию биомассы нефтеокисляющих микроорганизмов при ее концентрации не менее 10 г/л асв на сорбент "Эколан" (ТУ 2164-001-55959238-01), при соотношении сорбент:биомасса не менее 1:5 по массе, в следующих экспериментально подобранных условиях, обеспечивающих адсорбцию наибольшего количества биомассы:

- рН не выше 7,0;

- среда иммобилизации - водный раствор минерального удобрения (аммофос, или диаммофоска, или нитрофоска, или нитроаммофоска) с концентрацией 2-16 г/л;

- присутствие в водном растворе минерального удобрения поливалентных катионов алюминия в концентрации не более 100 мг/л.

Смешивают биомассу и сорбент в соотношении 5:1 по массе соответственно в обычном смесителе для сыпучих материалов с вращающимся корпусом типа бетономешалки в течение не менее 1 часа. Отделение сорбента с иммобилизованными клетками от остатков биомассы проводят с помощью сита с диаметром отверстий не более 1 мм. Диаметр подобран с учетом гранулометрического состава сорбента "Эколан". Остатки биомассы повторно используют для иммобилизации. Влажный сорбент с иммобилизованной биомассой сушат на воздухе до воздушно-сухого состояния (содержание влаги не более чем в исходном сорбенте "Эколан"). В результате в высушенном сорбенте содержится не менее 10⁹ кл/г нефтеокисляющих микроорганизмов.

Нефтезагрязненный грунт или нефтешлам размещают слоем, толщина которого не препятствует перемешиванию имеющимися техническими средствами. При необходимости, нефтешлам разбавляют чистым грунтом.

Биомассу нефтеокисляющих микроорганизмов на сорбенте вносят в нефтешлам или загрязненный нефтепродуктами грунт из расчета не менее 1 кг сухого сорбента с иммобилизованными клетками (концентрация клеток не менее 10⁹ КОЕ/г носителя) на тонну очищаемого нефтезагрязненного субстрата. Очищаемый грунт или нефтешлам регулярно перемешивают, поддерживают влажность очищаемого субстрата на уровне 60% от предельной влагоемкости, вносят минеральные удобрения в необходимых количествах.

На фиг.1 представлены показатели гидрофобности клеток выборки нефтеокисляющих микроорганизмов, в которой проводился отбор, описываемый в примере 1. На фиг.2 показано уменьшение концентрации нефтепродуктов в нефтезагрязненном грунте согласно предлагаемому способу микробиологической очистки. На фиг.3 представлены показатели гидрофобности клеток выборки нефтеокисляющих микроорганизмов, в которой проводился отбор, описываемый в примере 2.

В ходе исследований, проведенных на модельной выборке штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов кафедры генетики и микробиологии КубГУ, было обнаружено, что иммобилизация биомассы бактериальных клеток к сорбенту нефти "Эколан" прямо пропорциональна показателю гидрофобности. Поэтому для иммобилизации на сорбент следует использовать штаммы с наибольшей гидрофобностью, определенной по модифицированной методике Розенберга (Серебрякова Е.В., Дармов И.В., Медведев Н.П., Алексеев С.А., Рыбак С.И. Оценка гидрофобных свойств бактериальных клеток по адсорбции на поверхности капель хлороформа // Микробиология. - 2002. - т.71, - №2. - С.237-239). Также было выявлено, что для штаммов с М-морфотипом колоний углеводородокисляющая активность прямо пропорциональна показателю гидрофобности клеток. Для штаммов с S-морфотипом такая деструкционная активность не зависит от показателя гидрофобности. У высокогидрофобных же R-штаммов может наблюдаться обратная зависимость величин гидрофобности и деструкции тяжелых фракций нефти, следовательно, обладающие высоким показателем гидрофобности штаммы с R-морфотипом колоний необходимо проверять на эффективность деградации нефтепродуктов.

Аналогично, был осуществлен отбор аборигенных нефтеокисляющих микроорганизмов, используемых при очистке. Были определены оптимальные условия нанесения биомассы нефтеокисляющих микроорганизмов на носитель-сорбент нефти "Эколан".

Была проведена иммобилизация биомассы клеток отобранного нефтеокисляющего микроорганизма на "Эколан" при различных условиях, влияющих на этот процесс. Для этого были приготовлены 15 колб на 100 мл, в каждую внесли по 50 мл биомассы клеток штамма Rhodococcus erythropolis F1, поместили по 10 г сорбента "Эколан", перемешали и инкубировали, причем в каждой колбе были созданы разные сочетания факторов - концентрации катионов алюминия (внесенного в составе сульфата алюминия трехвалентного 18-водного Al₂(SO ₄)₃*18Н₂О при соответствующем перерасчете на массу соли), рН и длительности культивирования. Во всех колбах измерили количество адгезированных на сорбенте клеток (табл.1).

Таблица 1
Адгезия клеток Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271) на сорбенте "Эколан" при различных условиях
номер опыта	условия иммобилизации			адгезия клеток, %
	pH (-lg[H+])	Al3+, мг/л	время, ч
1	2	3	4	5
1	6,70	14,85	24,00	34,77
2	5,40	2,7	1,00	24,70
3	8,00	2,7	1,00	9,29
4	5,40	27,00	1,00	49,25
5	8,00	27,00	1,00	29,21
6	5,40	2,7	47,00	43,17
7	8,00	2,7	47,00	12,19
8	5,40	27,00	47,00	22,96
9	8,00	27,00	47,00	20,21
10	5,40	39,15	1,00	64,98
11	5,40	51,3	1,00	69,40
12	5,40	63,45	1,00	69,91
13	5,40	75,6	1,00	69,35
14	5,40	87,75	1,00	70,54
15	5,40	99,9	1,00	69,90

Наибольшая адгезия для Rhodococcus erythropolis F1 на "Эколан" происходила при концентрациях Al³⁺ не более 99,9 мг/л, при кислых значениях рН и длительности контакта клеток и сорбента не менее 1 часа (колбы №10-15). Адгезия достигает максимальных значений 69-70% при концентрациях алюминия более 39,15 мг/л.

Как показали результаты апробации и предварительного моделирования в лабораторных условиях, а также анализ литературы, предлагаемый способ очистки нефтяных шламов и загрязненного нефтепродуктами грунта основан на следующих отличиях и преимуществах:

- при использовании сорбента "Эколан" в качестве носителя клеток оправдано использование микроорганизмов с гидрофобной клеточной стенкой, поскольку поверхность сорбента гидрофобна после карбонизации древесины при термообработке;

- гидрофобность клеток обеспечивает начальные стадии их взаимодействия с окисляемым нефтепродуктом, в то же время она определяет негативное воздействие некоторых углеводородных фракций на микроорганизмы, что проявляется в различиях зависимости деструкционной активности от показателя гидрофобности клеток для бактерий с R-, S- и М-морфотипом колоний на плотной питательной среде;

- при значениях рН 7 происходит частичная компенсация отрицательного заряда поверхности носителя и микробных клеток, в результате чего уменьшается их электростатическое отталкивание при адсорбции микроорганизмов;

- присутствие поливалентных катионов алюминия ускоряет начальные стадии адсорбции клеток за счет образования катионных мостиков между отрицательно заряженными группировками на поверхностях носителя и клетки. Также катионы участвуют в экранировании отрицательно заряженных группировок взаимодействующих поверхностей. В результате увеличивается количество иммобилизованных на носителе клеток, достигая значения более 10⁹ кл/г. Это позволяет использовать меньшее количество носителя для иммобилизации клеток и тем самым сделать способ микробиологической очистки более экономичным;

- раствор минерального удобрения, в котором происходит иммобилизация, служит источником биогенных элементов на начальных стадиях биодеградации поллютанта;

- при нанесении клеток на "Эколан" не используются органические добавки - сахароза и др. осмопротекторы, а также дополнительные источники питания для иммобилизованных клеток, с целью предотвращения развития грибной микрофлоры. Единственным источником углерода для микрофлоры являются сорбируемые из грунта или шлама углеводороды;

- сушка отделенного влажного сорбента позволяет удалить микрослой воды, остающийся между клеткой и поверхностью носителя, и сделать адсорбцию тем самым более прочной;

- в нефтезагрязненном грунте носитель сорбирует часть нефтепродуктов, нормализуя тем самым водный и газовый режим окружающего грунта и оптимизируя их как для интродуцированной, так и для аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры;

- в случае высокой степени загрязнения подвижная часть нефтяного поллютанта адсорбируется и тем самым фиксируется в зоне биоремедиации, предотвращая заражение прилегающих горизонтов;

- при внесении в нефтезагрязненный песчаный грунт частицы сорбента служат центрами колонизации окружающего субстрата нефтеокисляющей микрофлорой, что было подтверждено высевами на питательные среды;

- благодаря адсорбции в частицах сорбента-носителя части нефтепродуктов-загрязнителей иммобилизованные клетки получают селективное преимущество в снабжении источником углерода и энергии;

- в связи с протективными свойствами иммобилизации в неблагоприятных условиях микробная утилизация углеводородов на частицах носителя происходит более активно, в то время как свободные клетки малоактивны.

Пример 1. Отбирали микроорганизм для иммобилизации из модельной выборки штаммов рабочей коллекции нефтеокисляющих микроорганизмов кафедры генетики и микробиологии Кубанского государственного университета. Все микроорганизмы были способны деградировать нефть. Для всех микроорганизмов определяли показатель гидрофобности клеток и морфотип колоний. Для определения показателя гидрофобности клеток 4 мл бактериальной суспензии встряхивали с 1 мл хлороформа в пробирке объемом 10 мл на орбитальной качалке при 150 об/мин, отстаивали для разделения фаз в вертикальном положении в течение 1 часа. Далее измеряли оптическую плотность бактериальной суспензии и гидрофобность клеток рассчитывали по формуле (1)

где ПГ - показатель гидрофобности (%), ОП ₀ - исходная оптическая плотность бактериальной суспензии (условные единицы), ОП₁ - оптическая плотность бактериальной суспензии после встряхивания с хлороформом (условные единицы). Для определения морфотипа колоний нефтеокисляющие бактерии выращивали на универсальной плотной питательной среде - питательном агаре (состав (г/л): панкреатический гидролизат рыбной муки 24,0; натрий хлористый 4,0; агар микробиологический 12,0±2,0; рН 7,3±0,2; производство ГНЦПМ г.Оболенск, Россия). Среду стерильно разливали в чашки Петри, посев бактерий на ее поверхность осуществляли методом истощающего штриха. Засеянные чашки Петри инкубировали при комнатной температуре не менее 3 суток. По окончании культивирования визуально оценивали морфотип колоний каждого штамма - R либо S или М-форма. (Е.С.Милько, Н.С.Егоров. Гетерогенность популяции бактерий и процесс диссоциации, М., 1991, 144 с.).

Штаммы ранжировали по показателю гидрофобности (фиг.1). Как обладающий наибольшим показателем гидрофобности определили штамм Rhodococcus sp. J8, имевший R-тип колоний. Обладающим наибольшей гидрофобностью штаммом из числа имеющих S- или М-морфотип был определен Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271). Низкая деструкция мазута штаммом Rhodococcus sp. J8 по сравнению с Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271) (табл.2) явилась основанием для отвержения первого из упомянутых. По тем же причинам были отвержены штаммы Dietzia marts B6 и Rhodococcus sp. Z7, имеющие R-морфотип колоний. Вследствие этого для дальнейшей работы выбрали штамм Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271).

Таблица 2
Свойства клеток штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов из выборки 1, обладающих наибольшим показателем гидрофобности
штамм	показатель гидрофобности клеток, %	морфотип колоний	деструкция мазута, %
Rhodococcus sp. J8	88	R	28,09
Dietzia maris В6	41	R	55,42
Rhodococcus sp. Z7	33	R	57,23
Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271)	24	S/M	85,02

Подготовили 5 литров биомассы нефтеокисляющего микроорганизма Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271), полученной путем выращивания глубинным культивированием. Биомассу подготавливали на основе водного раствора минерального удобрения - аммофоса, взятого в концентрации 2 г/л. рН раствора 5,6. Вносили хлорид алюминия трехвалентного 12-водный в концентрации 0,6327 г/литр для обеспечения адгезии большего количества клеток на носителе. Сорбент "Эколан" в количестве 1 кг и биомассу в количестве 5 литров тщательно перемешивали и инкубировали 1 час, отбрасывали на сито (металлическая сетка с диаметром отверстий 1 мм).

Влажный сорбент с иммобилизованными микроорганизмами размещали тонким слоем на полиэтиленовой пленке и сушили при нормальных условиях до воздушно-сухого состояния. После просушки 1 кг его с концентрацией клеток более 10⁹ кл/г вносили в 1000 кг загрязненного нефтепродуктами грунта, размещенного на бетонной поверхности слоем 0,3 метра. Перемешивали, грунт увлажняли до 60% от предельной влагоемкости, вносили аммофос в количестве 500 г. Очищаемый грунт регулярно (1 раз в 2 недели) перемешивали, влажность и концентрацию биогенных элементов измеряли и поддерживали на начальном уровне. Измеряли концентрацию остаточных нефтепродуктов по истечении полутора и трех месяцев эксперимента. Результаты испытаний приведены на фиг.2. За 3 месяца эксперимента концентрация нефтепродуктов при обработке препаратом снизилась с 23,7 до 4,71 г/кг, степень очистки составила 80,1%.

Пример 2. Отбирали микроорганизм для иммобилизации из модельной выборки штаммов рабочей коллекции нефтеокисляющих микроорганизмов кафедры генетики и микробиологии Кубанского государственного университета. Все микроорганизмы были способны деградировать нефть. Для всех микроорганизмов определяли показатель гидрофобности клеток и морфотип колоний, как описано в примере 1. Штаммы ранжировали по показателю гидрофобности (фиг.3). Наибольшим показателем гидрофобности обладали штаммы, имеющие R-тип колоний - В4, J1, К10, J5. Среди S и М-штаммов наибольшим показателем гидрофобности обладал штамм К2. Наибольшая деструкция мазута среди штаммов В4, J1, К10, J5, К2 отмечена для штамма J5, имеющего R-морфотип колоний (табл.3).

Таблица 3
Свойства клеток штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов из выборки 2, обладающих наибольшим показателем гидрофобности
штамм	показатель гидрофобности клеток, %	морфотип колоний	деструкция мазута, %
В4	43	R	41,07
J1	38	R	44,99
К10	36	R	44,55
J5	35	R	53,15
К2	35	S/M	35,11

Штамм J5 использовали для иммобилизации на "Эколане". Для этого в 5 л биомассы, приготовленной на основе водного раствора минерального удобрения - аммофоса, взятого в концентрации 2 г/л, внесли хлорид алюминия трехвалентного 12-водный в концентрации 0,6327 г/литр для обеспечения адгезии большего количества клеток на носителе. Также внесли 1 кг сорбента "Эколан", инкубировали при перемешивании в течение 1 часа. Затем сорбент отбросили на сито и сушили при нормальных условиях до воздушно-сухого состояния.

Способность к деструкции мазута нефтеокисляющим микроорганизмом J5 наряду со способностью к адгезии к сорбенту определяет возможность эффективного использования "Эколана" с иммобилизованной биомассой данного штамма в очистке аналогично примеру 1.

1 кг препарата с концентрацией клеток более 10⁹ кл/г вносили в 1000 кг загрязненного нефтепродуктами грунта, размещенного на бетонной поверхности слоем 0,3 метра. Перемешивали, грунт увлажняли до 60% от предельной влагоемкости, вносили аммофос в количестве 500 г. Очищаемый грунт регулярно (1 раз в 2 недели) перемешивали, влажность и концентрацию биогенных элементов измеряли и поддерживали на начальном уровне. За 3 месяца эксперимента степень очистки составила 80,1%.

Пример 3. В 2 стакана на 400 мл вносили по 200 г смеси нефтешлама с грунтом при содержании нефтепродуктов 98 г/кг, в один добавили 0,2 г сорбента "Эколан" с отобранными и иммобилизованными аналогично примеру 1 в количестве более 10⁹ кл/г сорбента нефтеокисляющими микроорганизмами Rhodococcus erythropolis F1 (BKM Ac-2271). Во второй стакан нефтеокисляющие микроорганизмы не вносили. В оба стакана вносили воду до 60% полной влагоемкости и аммофос в количестве 0,1 г. Очищаемый грунт регулярно перемешивали, влажность и концентрацию биогенных элементов измеряли и поддерживали на начальном уровне. После 6 месяцев очистки степень деструкции углеводородов при их начальной концентрации 98 г/кг составила 55%. В стакане, куда нефтеокисляющие микроорганизмы не вносили, снижение концентрации не превышало 3%.

Таким образом, показана эффективность способа микробиологической очистки загрязненного нефтью и нефтепродуктами грунта и нефтяных шламов, позволяющего расширить сферу применения микробиологического метода ликвидации углеводородных загрязнений.

Практическая апробация разработанного способа очистки проведена в ходе работ по биологической детоксикации нефтезагрязненного грунта и шламов нефтеотделительных установок на территории Краснодарского нефтеперерабатывающего завода.

Применение способа согласно изобретению позволяет осуществлять эффективную очистку нефтезагрязненного грунта и нефтяного шлама.