фармацевтическое средство

Формула изобретения

1. Фармацевтическое средство на основе полиоксиариленового эфира, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит гидрохинон при массовом соотношении между собой полиоксиариленовый эфир : гидрохинон от 83:17 до 5:95.

2. Средство по п.1, обладающее сочетанным антиоксидантным, антигипоксантным, противоопухолевым, радиопротекторным, иммуностимулирующим и биоцидным действием.

3. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве полиоксиариленового эфира оно содержит 2-(1-окси-4-гидроксифенилен) бензохинона.

4. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве полиоксиариленового эфира оно содержит продукты перетирания 2-(1-окси-4-гидроксифенилен) бензохинона с гидрохиноном.

5. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве полиоксиариленового эфира оно содержит 4-гидроксифенилен-2,4-диоксибензол.

6. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве полиоксиариленового эфира оно содержит продукты перетирания 4-гидроксифенилен-2,4-диоксибензола с гидрохиноном.

7. Способ получения средства по п.1, заключающийся в том, что полиоксиариленовый эфир смешивают с гидрохиноном и полученную смесь перетирают до образования однородной массы.

Описание изобретения к патенту

Заявляемое изобретение относится к области медицины, а именно к биологически активным веществам (БАВ), перспективным для использования в пищевой и молочной промышленности, медицине, ветеринарии, косметике, а также смежных отраслях производства.

Известна многочисленная группа веществ, обладающих антиоксидантным (АО) и/или антигипоксантным (АГ) действием. К их числу, в частности, относится цитохром С, убихинон, метилфеназин, ионол и другие (Машковский М.Д. Лекарственные средства, - М.: Медицина, т.2 стр.73-76; Энциклопедия лекарств, изд.8, - М.: РЛС. 2001. 1503 с.; Справочник ВИДАЛЬ, - М.: АстраФармСервис, 2001, 725 с.; Виноградов В.М. Фармакология и токсикология, Сб. - Киев: Здоровье, 1972, №7, с.163). Так, в частности, убихинон (коэнзим Q) в дозе 200 мг/кг живого веса оказывает нормализующее воздействие на клетки в условиях некоторых гипоксии, являясь природным переносчиком электронов и занимая центральное место в цепи ферментов электронного транспорта, реагируя с тремя ферментными системами; НАД, Н-оксидазой, сукцинат KoQ-редуктазой и системой цитохромов (пат. РФ №1746886, 1991, кл. С08Р 32/06; заявка РСТ 96/08527, 1996, кл. С08G 61/10).

Недостатками большинства указанных веществ является узкий спектр действия, обусловленный значительным числом противопоказаний, недостаточная эффективность, сложная технология получения.

Широкое распространение получили производные поли-окси-фениленов (ПОФ) - препараты, выпускаемые под товарными знаками - Олифен, Триофен, Гипоксен, Спирофен (заявка РСТ №96/08527. 1996 кл. С08G 61/08527). Характерной особенностью поли-окси-фениленов является высокая степень сопряженности молекул, что при их введении в организм позволяет активно воздействовать на биоэнергетические процессы в клетках, улавливать и «гасить» свободные радикалы, воздействовать на реологию крови.

Данные свойства обусловили широкую область применения веществ этой группы, являющейся аналогом заявляемых изобретений по свойствам. В частности, ПОФ нашли применение в качестве в качестве препаратов, оказывающих общее нормализующее воздействие на функционирование клеток и клеточных систем организма (RU 2121852, 1999, Кл. А61К 31/375).

Соединения данного типа получали полимеризацией парабензохинона в присутствии щелочных агентов в водно-ацетоновой среде с добавками веществ, обеспечивающих введение в полимер замещающих групп, например, тиосульфата натрия или гуанидина, с последующим выделением целевого продукта с помощью экстракции или иными методами.

Недостатком соединений данного типа является получение в ходе реакции смеси олигомеров, что приводит к плохой стандартизуемости препарата, плохой растворимости соединений в воде, наличию неприятного привкуса, наличию осложнений (особенно при внутривенном введении), недостаточно высокой эффективности, стимулирующему воздействию на рост микроорганизмов (SU 820195), что является негативным фактором при длительном хранении препаратов и композиций на их основе.

Известны разработанные автором БАВ, представляющие собой производные полиоксиариленовых эфиров (ПОАЭ), в основе которых лежат два бензольных кольца или бензольное и хиноидное кольца, соединенных эфирной связью (RU 2224737, 2002; RU 2230467, 2003 - кл. А61К 31/05).

Полученные соединения наряду с выраженными антигипоксантными и антиоксидантными свойствами обладают широким спектром иного биологического воздействия, в частности проявляют выраженное биоцидное действие. Однако указанные свойства, как показали проведенные исследования, могут быть существенно усилены, а спектр их действия существенно расширен.

Наиболее близким по структуре и свойствам является 4-гидроксифенилен-2,4-диоксибензол (RU 2224737, 2002, - кл. А61К 31/05), проявляющий при введении в организм сочетанное антиоксидантное (АО) и антигипоксическое (АГ) действие.

Однако данные свойства вещества могут быть усилены при использовании его в составе композиции. Такая композиция, в частности, может сочетать указанные свойства со способностью защищать организм от воздействия ионизирующего облучения и быть перспективной при лечении онкологических заболеваний.

Известно использование для лечения онкологических и им подобных заболеваний большого числа фармацевтических препаратов, таких как эмбихин, циклофосфан, дегранол, дипин, имифос, фотрин; цитостатиков, антибиотиков, антиметаболитов, алкалоидов, гормонов и т.д. (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1985, т.1-2. - 585 с.).

Недостатками большинства препаратов являются высокая токсичность, многочисленные негативные побочные эффекты, относительно невысокая эффективность.

Наибольшее распространение в качестве противоракового препарата в настоящее время получили цитокины, в частности интерфероны, используемые как самостоятельно, так и в рамках комплексной терапии (Малиновская В.В., Мурзабаева Р.Т., Манахова Л.С. и др. Функционирование системы интерферона при различных способах и дозах введения альфа-2-интерферона // Вопросы вирусологии. - 1989. - Т.34 - N2. - С.180-183). Однако эти препараты весьма дорогостоящи, имеют ограничения по применению.

Препараты интерферонов являются ближайшими аналогами по применению заявляемого противоракового препарата.

При лечении онкологических заболеваний в рамках комплексной терапии большую роль имеет радиотерапия, в рамках которой зона опухоли подвергается воздействию потоков ионизирующего излучения. В связи с негативным воздействием радиации на организм в целом наибольший интерес представляют препараты, сочетающие противораковые свойства с радиопротекторными.

В настоящее время в качестве радиопротекторов используют такие препараты, как цистамин гидрохлорид, мексамин, батиол, тезан и другие (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1985, т.2. - с.189-191).

Однако данные препараты не являются противоопухолевыми, имеют большое число противопоказаний и приводят к поражению систем жизнеобеспечения организма.

Наиболее близким к заявляемому препарату, сочетающему противоопухолевые и радиопротекторные свойства, является БАД «Влаирин», представляющий собой экстракт каллусной ткани растения Ungernia Victora, содержащий 0.02% активного начала (полисахаридов) (RU 2141838, 1999; RU 2147439, 2000 - Кл. А61К 35/78).

Недостатком БАД является практическая невозможность выделения активного начала в более высоких концентрациях, нестойкость полисахаридов при хранении, ограниченность природных ресурсов, т.к. растение является эндемическим.

Технической задачей, решаемой автором, являлось создание композиции, усиливающей свойства ПОАЭ и расширяющей область их потенциального применения, в частности проявляющей противоопухолевое и радиопротекторное действие.

Технический результат достигался в результате использования композиции, содержащей смесь ПОАЭ с гидрохиноном в массовом соотношении от 99:1 до 1:99. При этом в качестве ПОАЭ может быть использованы как 4-гидроксифенилен-2,4-диоксибензол (ГФБ), получаемый по RU 2224737, так и 2-(1-окси-4-гидроксифенилен) бензохинона (ОГХ), получаемый по RU 2230467, а также продукты их взаимодействия с гидрохиноном.

Появление новых свойств композиции, по-видимому, обусловлено взаимодействием между поляризованными молекулами ПОАЭ, для которых характерна сопряженные структуры молекулярных орбиталей и поляризованными молекулами гидрохинона (ГХ), которые при взаимодействии позволяют получить сверхсопряженные комплексы как в растворе, так и в результате контакта между порошками ингредиентов.

Вероятность появления таких комплексов возрастает в том случае, если проводить интенсивное перетирание смесей ПОАЭ и ГХ в ступке, шаровой мельнице или с помощью дезинтегратора. Повышение времени истирания (пример 3) приводит к изменению свойств композиции, в частности повышению до определенного предела антиоксидантных характеристик. Т.к. в ходе перемешивания твердофазная реакция между компонентами проходит не полностью, то получаемая композиция, как правило, содержит смесь ГХ, традиционного ПОАЭ и комплекса ПОАЭ·ТХ.

Способ получения композиции тем самым заключается в смешении ингредиентов в сухом виде и перетирании полученной смеси до получения равномерной массы. Время истирания зависит от состава используемой для этой цели смеси, используемого оборудования и особенности требований, предъявляемых к получаемому препарату.

Как показали проведенные эксперименты, новая композиция обладает более сильными АО и АГ свойствами по сравнению с входящими в нее ингредиентами, биоцидным действием по отношению к микроорганизмам, а также эффективным воздействием как на отдельные органы и системы организма человека или животного, так и на организм в целом. Указанные свойства, в частности, проявляются в противоопухолевом, радиопротекторным и иммуностимулирующем действии.

Способ получения композиции тем самым заключается в смешении ингредиентов в сухом виде и перетирании полученной смеси.

Композиция, в зависимости от состава имеет ЛД₅₀ от 800 до 6500 мг/кг веса; ЛД₁₆ от 300 до 1500 мг/кг веса, ЛД₈₄ от 3000 до 6500 мг/кг веса при разовом приеме не более 5 мг/кг веса. По сравнению с Олифеном композиция примерно в 3-5 раз менее токсична. По показателю острой летальной токсичности и данным морфологического исследования ее можно отнести к IV классу малоопасны веществ (ГОСТ 12.1.007-76. ССБТ. «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности». Данные токсикометрии, данные наблюдений за экспериментальными животными на протяжении 14 дней после острого введения, а также данные некропсии позволяют отнести ее к IV классу малотоксичных лекарственных вещес (H.Hodge et all. Clinical Toxilogy of Commercial Products / Acute Poisoining. Ed. IV, Baltimore, 1975, 427 p.) В настоящее время получено разрешение на ее использование в качестве пищевой добавки. Проводятся дальнейшие испытания по изучению свойств композиции и механизма ее действия.

Препарат вводятся перорально или наружно в виде мазей, эмульсий, порошка, растворов в воде, соке, водоспиртовых смесях и других композициях. При пероральном приеме композиция применяется самостоятельно или в виде смеси с другими ингредиентами в качестве пищевой или кормовой добавки. В зависимости от формы применения и особенностей решаемой задачи подбирается оптимальный состав композиции, т.к. в зависимости от содержания тех или иных ингредиентов ее свойства меняются в очень широких пределах и весьма неодинаково.

Сущность и преимущества изобретения иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1. Навески гидрохинона и 4-гидроксифенилен-2,4-диоксибензола (ГФБ), полученного по технологии RU 2224737, взвешивались и смешивались в заданном соотношении. Состав полученных композиций приведен в табл.1.

Таблица 1 Состав композиций на основе ГФБ
№ композиции	Состав, % мас.
	гидрохинон	ГФБ
Композиция 1	99	1
Композиция 2	95	5
Композиция 3	90	10
Композиция 4	66	34
Композиция 5	34	66
Композиция 6	10	90
Композиция 7	1	99

Пример 2. Навески гидрохинона и 2-(1-окси-4-гидроксифенилен) бензохинона (ОГХ), полученного по RU 2230467, взвешивались и смешивались в заданном соотношении. Состав полученных композиций приведен в табл.2.

Таблица 2 Состав композиций на основе ОГХ
№ композиции	Состав, % мас.
	гидрохинон	ОГХ
Композиция 8	99	1
Композиция 9	95	5
Композиция 10	90	10
Композиция 11	70	30
Композиция 12	34	66
Композиция 13	10	90
Композиция 14	1	99

Пример 3. Композиции, полученные по примерам 1 и 2, (№2 и №11) подвергались дальнейшей переработке истиранием в ступке (ИС) или шаровой мельнице (ШМ) или путем пропускания через дезинтегратор (ДИ). В полученной смеси определялось содержание свободного ГХ и ПФЭ, на основании чего рассчитывалось количество ГХ, связанного в комплекс и оценивали антиоксидантную антивность.

Для анализа общей антиоксидантной активности субстанций использовали спектрофотометрический метод с дианидизиновым реактивом и рибофлавином по оптической плотности при длине волны 460 нм на спектрофотометре СФ-56. Полученные результаты приведены в табл.3.

Таблица 3 Состав композиций после дополнительной переработки смесей
№ композиции		Способ переработки	Состав композиции					Показатель антиоксидантной активности (Ед. опт. пл/мг белка
			ГХ	ПОАЭ		ПОАЭ·ГХ
ГФБ
Композиция 2		Без переработки	95	5		-	20±4
Композиция 2		5 мин истирания	94.7±0.2	4.8±0.2		0.5±0.3	25±4
Композиция 2		10 мин истирания	94.7±0.6	4.3±0.6		1.0±0.6	32±5
Композиция 2		15 мин истирания	94.0±0.5	4.0±0.5		2.0±0.5	34±4
Композиция 2		20 мин истирания	93.8±0.6	3.4±0.2		2.8±0.7	38±4
Композиция 2		25 мин истирания	93.3±0.4	3.6±0.4		3.1±0.5	40±5
Композиция 2		30 мин истирания	93.1±0.5	3.6±0.4		3.3±0.5	40±4
ОГХ
Композиция 11	Без переработки		70		30	-	32±5
Композиция 11	20 мин истирания		66.8±0.6		27.4±0.5	6.8±0.7	38±4
Композиция 11	ШМ 5 мин		65.2±0.6		27.0±0.6	7.8±1.0	40±4
Композиция 11	ШМ 10 мин		65.8±0.6		26.4±0.6	8.0±0.6	42±5
Композиция 11	Дезинтегратор		65.0±0.6		27.4±0.6	7.6±0.4	38±5

Пример 4. Влияние состава препарата на радиопротекторные свойства.

Радиопротекторное действие препаратов изучалось на мышах линии ДВА/2. Препараты вводили с питьевой одой в течении 3-х суток до облучения на рентгеновской установке и 10-ти суток после облучения. Животные контрольной группы получали воду без добавок. Облучение проводили в конце 3-х суток применения препаратов промежуточной между сублетальной и летальной дозами - 630 Рад.

Для оценки радиопротекторного действия проверяли влияние препаратов на образование эндогенных колоний в селезенках облученных мышей клетками костного мозга. Мышей забивали через 10 суток после облучения, извлекали селезенки и фиксировали их в фиксаторе Буэна. Количество колоний подсчитывали невооруженным глазом. При определении среднего количества колоний и среднеквадратичного отклонения были получены результаты, приведенные в табл.4.

Таблица 4 Влияние состава композиции и дозы применяемого препарата на радиопротекторные свойства композиции
Состав композиции		Обработка	Доза препарата, мг/мышь	Количество колоний на селезенку
гидрохинон	ПОАЭ
контроль		-	-	4.0±0.2
ОГХ
70	30	ШМ, 10 мин	0.001	3.6±0.3
70	30	ШМ, 10 мин	0.01	4.1±0.2
70	30	ШМ, 10 мин	0.1	6.8±0.3*
70	30	ШМ, 10 мин	1.0	11.6±0.4*
70	30	ШМ, 10 мин	5.0	9.2±0.7*
70	30	ШМ, 10 мин	1.0	11.6±0.4*
70	30	без	1.0	9.4±0.4*
99	1	без	1.0	4.8±0.5*.
95	5	без	1.0	5.3±0.4*
90	10	без	1.0	5.8±0.5*
66	34	без	1.0	8.4±0.5*
34	66	без	1.0	9.0±0.4*
10	90	без	1.0	8.1±0.6*
1	99	без	1.0	7.3±0.7*
ГФБ
99	1	без	1.0	4.1±0.5
95	5	без	1.0	4.4±0.4
90	10	без	1.0	5.0±0.5
70	30	без	1.0	7.4±0.4*
34	66	без	1.0	8.2±0.4*
10	90	без	1.0	7.6±0.5*
1	99	без	1.0	5.8±0.5*
70	30	ШМ, 10 мин	1.0	8.8±0.4*
34	66	ШМ, 10 мин	1.0	9.9±0.7*
10	90	ШМ, 10 мин	1.0	8.2±0.5*
* р>005.

Композиции без обработки получали индекс А, после обработки - индекс Н.

Пример 5. Для дальнейших исследований использовали, в основном, композиции, содержащие

- 17% мас. ГХ и 83% мас. ГФБ (препарат Эпофен-А);

- 5% мас. ОГХ и 95% мас ГХ (препарат Эпохин-А);

- продукты их переработки на шаровой мельнице в течении 10 мин

соответственно препараты Эпофен-Н и Эпохин-Н

Эпофены представляли собой монокристаллические порошки черного цвета. рН 1% раствора 8.0-8.2, LD₅₀ (крысы-самцы)=6420±180 мг/кг

Эпохины представляли собой монокристаллические порошки темно-серого цвета. рН 1% раствора 7.6-7.8, LD₅₀ (крысы-самцы)=3820±120 мг/кг

Пример 6. Противоопухолевое действие препарата.

Воздействие исследовалось на 70 мышах-самках серии Г1СВА (С57В1)6 весом 18-20 г. Животным прививали диплоидный вариант асцитной опухоли Эрлиха внутрибрюшинно по 106 клеток в 0,2 мл асцита.

Исследуемый препарат ежедневно в течение 15 дней после инокуляции опухоли ежедневно, начиная с даты прививки опухоли, вводили перорально в виде водного раствора, содержащего 5 мг препарата на мышь. В качестве контроля использовали 15%-ный раствор спирта. Так как продолжительность жизни мышей с асцитной формой опухоли в среднем 14-16 дней, то забор животных осуществляли на 5 и 10-й день после прививки.

Оценка эффективности препарата осуществлялась исходя из количества опухолевых клеток в 1 мл асцита (ОКА) и количества опухолевых клеток на 1 г веса животного (СКВ). Количество опухолевых клеток в 1 мл асцита определяли с помощью камеры Горяева по общепринятой методике.

Одновременно оценивалось состояние иммунокомпетентных органов - тимуса и селезенки по изменению его относительного веса на 5-й и 10-й день после инокуляции опухоли. Полученные результаты приведены в табл.5.

Полученные результаты свидетельствуют об эффективности препарата в достаточно широком диапазоне концентраций. Известно, что опухолевый процесс вызывает повышение на 5-й день относительного веса селезенки на 85%, что соответствует данным контроля. Компенсация этого явления при введении препарата свидетельствует о защитном действии препарата.

Таблица 5. Эффективность состава композиции на развитие асцитной опухоли Эрлиха у мышей (через дробь-степень торможения)
Дни после прививки	Показатель	Контроль	Эпофен-А	Эпофен-Н	Комп.1-Н	Комп-7-Н	Эпохин-А	Эпохин-Н	Комп.14-Н
5	Отн. вес тимуса	2.5±0.8	2.3±0.7	2.1±0.5	2.5±0.6	2.2±0.8	2.4±0.8	2.2±0.7	2.2±0.5
	Отн. вес	10.7±2.4	8.2±0.7	7.1±0.8	10.2±0.6	6.7±0.6	7.2±0.7	7.1±0.8	7.7±0.6
	селезенки		23%	34%	5%	37%	34%	35%	28%
	ОКА ОКБ
10	отн, вес тимуса	0.9±0.4	0.8±0.4	0.7±0.4	0.8±0.4	0.7±0.4	0.8±0.4	0.7±0.4	0.8±0.4
	отн. вес селезенки	4.9±1.6	4,9±1.5	5.9±1.6	4.0±1.5	6.7±1.6	7.7±1.5	6.6±1.6	5.8±1.5
	ОКА	200±70	60±30	52±30	130±50	86±30	40±10	40±10	72±30
			70%	74%	35%	57%	80%	80%	64%
	ОКБ	50±8	20±6	13±5	40±10	12±6	10±4	10±4	12±5
			60%	74%	20%	76%	80%	80%	76%
	отн. к-во асцита	0.24±0.03	0.23±0.03	0.21±0.03	0.24±0.03	0.21± 0.03	0.20±0.03	0.16±0.03	0.18±0.03

Пример 7. Эффективность применения композиции Эпофен-Н при онкологических заболеваниях проводились в НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН в комплексном лечении женщин с раком молочной железы в стационарном отделении на 32 больных в возрасти от 32 до 50 лет, которые получали химио- и лучевую терапию в сочетании с приемом антиоксиданта.

Эффективность проводимого лечения оценивали клиническими и биохимическими методами. Материалов дня исследования служили эритроциты и плазма крови. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по концентрации малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови. Систему ферментативной антиоксидатной защиты (АОЗ) оценивали по состоянию ферментов эритроцитов: каталазы, супероксиддисмутазы (СОД), глугатионлероксидазы (ГП) и глугатионредуктазы (ГР).

В ходе проведенных исследований было установлено, что при выраженных клинических признаках интенсивность процессов ПОЛ повышается. При этом содержание МДА у больных было в среднем в 2,5 раза выше нормы (7,1 мк М/л + 2,1). Анализ динамики этого показателе выявил, что в процессе лечения, включающего полихимио- и лучевую терапию в комплексе с «Эпофеном», содержание МДА в крови больных снижалось до 5,5+1,1 мкМ/л, а в группе, не получавшей «Эпофен», содержание МДА повышалось до 9,7+2,7 мкМ/л.

Изучение динамики активности ферментов антиоксидантной системы также показало ряд особенностей у больных опытной группы. У группы больных, не получавших «Эпофен», активность каталазы в эритроцитах в процессе лечения имела тенденцию к снижению с 17,2+2,5 до 10,4+2,1 мкЕД/эр. В то же время у группы больных, получавших «Эпофен», она повышалась с 17,9+2,6 до 22,7 + 3,1 мкЕД/эр. Поскольку активность каталазы является количественным показателем антиоксидантной защиты организма, полученные результаты свидетельствуют о том, что у группы больных, получавших «Эпофен», лучше работают механизмы, защищающие клетки от агрессивных продуктов перекисного окисления, прежде всего - перекиси водорода. Дополнительным косвенным свидетельством этого факта является увеличение осмотической резистентности эритроцитов у этих больных.

В свою очередь СОД является ключевым ферментом внутриклеточной антирадикальной защиты. Было выявлено, что в ходе лечения активность СОД в эритроцитах больных контрольной группы также снижалась с 260+35 до 165+39 усл.ед./мл.эр., а в опытной группеактивность СОД не только не менялась, но и имела тенденцию kJ увеличению с 250+25 до 283+31 усл.ед./мл.эр.

Ферменты ГР и ГП (глутатионовая антипероксидлая система) при потреблении «Эпофена» более эффективно защищают клетки от пероксидного стресса. Данные исследования показали, что после проведения стандартного лечения у больных обеих групп уровень глутатиона был ниже нормы приблизительно на 35%. Потребление БАД «Эпофен» позволило увеличить активность ГР с 22,0+4,1 до 45,2+9,1 мМ глут-8Н/мл эр. по сравнению с контролем - с 24,5+4,9 мМ глут-8Н/мл эр. до 32,1+5,0 мМ глут-8Н/мл эр. Активность ГП при этом повысилась с 10,5+1,5 до 45,6+8,5 мМ глут-8Н/мл эр., тогда как в контроле она увеличилась только с 13,2+2,4 до 25,3+3,8 мМ глуг-8Н/мл эр.

Эти данные свидетельствуют о положительном влиянии БАД «Эпофен» на общую неспецифическую антиокислительную резистентность организма больных. При потреблении «Эпофена» у больных опытной группы отмечалось более благоприятное течение заболевания в целом. У них наблюдалось улучшение самочувствия, уменьшалось количество повторных обострении, отмечалась более стойкая ремиссия, улучшались показатели иммунитета, больные могли в срок проводить повторный курс химио- и лучевой терапии.

Примеры иного воздействия препарата на клетки и клеточные системы организма.

Пример 7. Влияние препарата на живую клетку. Влияние композиции на энергопродуцирование изолированных митохондрий скелетных мышц крыс проводили на примере композиций «Эпофен-Н» и «Эпохин-Н». Суспензию митохондрий, выделенную из гомогената скелетных мышц крысы, в среде состава (моль): сахароза - 0,25, MOPS - 0,01, калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (КЭТК) - 0,002 при рН среды 7,4, помещали в среду инкубации, состоящей (моль): хлористый калий - 0,12, MOPS - 0,011, при рН 7,4. Дыхание митохондрий измеряли на полиграфической ячейке, в которой содержалось 0,004 моль глютамата калия в качестве субстрата окисления, 0,0006 моль аденозиндифосфата (АДФ) и 0,00005 моль 2,4-динитрофенола.

Влияние композиции по сравнению с ионолом и олифеном на потребление митохондриями кислорода в различных условиях представлено в табл.6.

Как следует из данных табл.6, введение композиций вызывает, как и в случае использования олифена, сильное ингибирование дыхания в 4-м метаболитном состоянии, тогда как ионол практически не влияет на этот параметр.

Добавление разобщителя типа 2,4-динитрофенола в этом состоянии стимулирует дыхание. Полученные результаты указывают, что композиция ингибирует АТФ-азу митохондрий, при этом наибольший эффект наблюдается при использовании Эпофен-Н. В этом случае потребление АДФ на единицу поглощенного кислорода возрастает примерно на 70%.

Таблица 6 Потребление кислорода митохондриями скелетных мышц крысы в различных условиях
Показатели скорости дыхания митохондрий	Контроль	Концентрация препаратов, моль в мл
		ионол 0.0002	Олифен	Эпофен-Н	Эпохин-Н
V0	17.0	14.6	18.6	16.9	19.0
V 3	116.0	63.4	83.0	85.0	74.6
V4	46.3	46.6	22.0	17.2	16.2
Vднф	86.4	42.7	55.5	46.7	42.9
DKч-в (V 3/V4)	2.51	1.36	3.86	4.94	4.60
Vднф/V4	1.87	1.13	2.54	2.72	2.66
V 3/Vднф	1.34	1.20	1.59	1.82	1.74

Пример 8. Влияние препаратов на микроорганизмы.

В ходе проведенного исследования изучалось воздействие композиции на культуры микроорганизмов. Тест-культуры подбирали по принципу их разной чувствительности к неблагоприятным воздействиям внешней среды, в т.ч. к химическим препаратам, обусловленной:

- типом строения клеточной стенки (грациликутный, фармикутный, дрожжевой);

- наличием на стенке дополнительных поверхностных слоев (капсул и др.);

- происхождением штамма (музейный или клинический изолят);

- индивидуальными особенностями микроорганизма;

- плотностью популяции микроорганизмов, испытывающей «давление» неблагоприятного фактора.

В качестве дополнительного показателя учитывали принадлежность тест-культуры к нормальной (НМ) или условно-патогенной (УПМ) микрофлоры, Перечень и характеристики тест-культур приведены в табл.7

Таблица 7 Характеристика использованных тест-культур.
Тест-культура	Тип строения клеточной стенки	Представитель НМ или УПМ	Музейный штамм или клинический изолят	Устойчивость к неблагоприятным воздействиям
Escherichia coli М-17	Грациликутный	НМ	Музейный	Умеренная
Klebsiella pneumonia	Грациликутный	УПМ	Клинический изолят	высокая (капсулы)
Salmonella en-teritidis	Грациликутный	УПМ	Музейный	Слабая
Staphylococcus aureus 209	Фирмикутный	УПМ	Музейный	Умеренная
Lactobacillus acidophilus D76	Фирмикутный	HM	Музейный	Умеренная
Candida albicans	Дрожжевой	УПМ	Клинический изолят	Высокая

Методы исследования.

Тест-культуры выращивали в соответствующих питательных средах (Lactobacillus acidophilus в МРС-1; Escherichia coli M-17, Klebsiella pneumonia. Salmonella enteri-tidis, Staph. aureus 209 - в питательном бульоне; Candida albicans - в мальтозном бульоне) в течение 24 часов при 37°С. Из жидких культур готовили стандартные суспензии плотностью W-10 КОЕ/мл и наносили по 100 l на поверхность аналогичных агаровых сред, содержащих 0.025-0.5% исследуемых препаратов. Посевы инкубировали при 37°С в течении 5 суток, просматривая ежедневно, после чего производили подсчет колоний. Результаты выражали в lgKOE/мл (см. табл.7').

Примечание. В случаях отсутствия роста колоний считали, что 100 l пробы содержит менее 1 колонии, т.е. менее 10 колоний в 1 мл. Соответственно lgKOE/мл=1 правильно представлять как lgKOE/мл <1.

Таблица 7' Выживаемость микроорганизмов в присутствии препарата Эпохин-Н в зависимости от концентрации препарата и плотности микробной популяции
Тест-культуры	Контроль	Эпохин-Н,%
		0.025	0.05	0.1	0.25	0.5
Escherichia coli М-17	8	8	8	8	8	8
	7	7	7	7	7	7
	6	6	6	6	6	5
	5	5	5	5	5	4
	4	4	4	4	4	3
	5	3	3	3	3	3
Klebsiella pneumonia	8	8	8	2	1	1
	7	7	7	2	1	1
	6	6	5	1	1	1
	5	5	4	1	1	1
	4	4	3	1	1	1
	6	3	2	1	1	1
Salmonella enteritidis	8	8	8	8	8	5
	6	6	6	6	6	1
	4	4	4	4	4	1
Staphylococcus aureus 209	8	8	8	8	4	3
	7	7	7	7	3	1
	6	6	6	6	1	1
	5	5	5	5	1	1
	4	4	4	4	1	1
	3	3	3	3	1	1
Lactobacillus acidophilus D-76	8	8	4	3	1	1
	7	7	3	2	1	1
	6	6	1	1	1	1
	5	5	1	1	1	1
	4	4	1	1	1	1
	3	3	1	1	1	1
Candida albicans	8	8	8	8	7	7
	7	7	7	7	6	6
	6	6	6	6	5	5
	5	5	5	5	4	4
	4	4	4	4	3	3
	3	3	3	3	2	2

Пример 9. Влияние препарата на выращивание животных. Исследование заявляемых композиций в качестве кормовых добавок проводилось в СХПК им. Ленина Брянской области на примере выращивании молодняка крупного рогатого скота. В испытаниях использовали группы бычков 26-28-месячного возраста (12 клинически здоровых животных в группе) со средней живой массой 311±4,72 кг. Животные 1 группы (контрольная) и 2 группы (опытная) получали основной рацион, который был сбалансирован по основным питательным веществам в соответствии с общепринятыми нормами, но бычки опытной группы дополнительно к основному рациону получали Эпофен-Н (1 грамм на голову в сутки) и Эпохин-H.

Пробы крови для исследований брали в начале опыта (1 мая) и 3 июля перед предполагаемой сдачей подопытных животных на мясокомбинат для убоя, который по независящим от руководства СХПК им. Ленина обстоятельствам был отложен до 26 июля.

Динамика живой массы подопытных животных приведена в табл.8.

Таблица 8 Динамика изменения живой массы подопытных бычков в зависимости от природы препарата
Дата исследования	Контрольная группа(п-12)	Опытная группа Эпофен Н(п-12)	Опытная группа Эпохин Н (п-12) М±т	% прироста Эпофен Н/Эпофен Н
	М±т	М±т
1 мая 2004 г	298,33±8,42	305,83±6,21	308,9±6,4	102,3/103,6.
3 июля 2004 г	338,33±8,95	358,33±5,48	362,5±6,6	105.9/107.2
25 июля 2004 г	357,50±9,38	375,00±6,57	392,2±6,8	104.9/109.7

Пример 10. Влияние препарата на кроветворную систему и радиопротекторное действие препарата

Испытания проводились на откармливаемых на мясо бычках в СХПК им. Ленина Новозыбковского района Брянской области в условиях плотности загрязнения почвы хозяйства радиоактивным цезием 15-40 Ku/км² . Использовали группы бычков 26-28-месячного возраста (по 12 клинически здоровых животных в каждой группе) со средней живой массой 311±4,72 кг.

Контрольная группа получала основной рацион (ОР), который был сбалансирован по основным питательным веществам в соответствии с общепринятыми зоотехническими нормами. Опытная группа получала ОР+эпофен-Н (скармливался по 1 грамму на голову в сутки, ежедневно в течение 3 месяцев эксперимента).

Исследовались следующие параметры в крови, мышцах, печени, почках, кале и моче подопытных животных:

- концентрация продуктов перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид);

- концентрация восстановленного глутатиона (низкомолекулярные сульфгидрильные группы);

- концентрация окисленного глутатиона (низкомолекулярные дисульфидные группы);

- концентрация тяжелых металлов;

- комплекс гематологических показателей, включающий лейкограмму, анализ редуцирующей, адгезивной, поглотительной и микробицидной активности нейтрофилов, количество Т- и В-лимфоцитов, активность аспартатами-нотрансферазы и аланинамнотрансферазы, активность глутатион-транферазы и глутатионпероксидазы, концентрация белка и его фракций, глюкозы, креатинина, мочевины;

- проводился мониторинг радиоактивности всех скармливаемых подопытным животным кормов, прижизненной оценки радиоактивности животных и анализ радиоактивности парных туш и обвалка туш после убоя животных на Брянском мясокомбинате, во всех скармливаемых кормах определяли содержание тяжелых металлов.

Кровь брали трехкратно - в начале, середине и конце эксперимента. Анализы в кале и моче проводили в суточных образцах.

Количество лейкоцитов и эритроцитов в крови подсчитывали в камере Горяева, лейкоцитарную формулу - в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза. Фагоцитарный показатель (ФН) рассчитывали как процент нейтрофилов, способных к поглощению частиц латекса, фагоцитарный индекс (ФИ) - среднее число частиц латекса, поглощенных одним активным нейтрофилом, абсолютный фагоцитоз крови (АФ, 10/л) - общее количество частиц латекса, поглощаемое нейтрофилами в литре крови [Чумаченко В.Е., Высоцкий А.М., Сердюк Н.А., Чумаченко В.В. Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных. - Киев: Урожай, 1990. - 136 с.]. Функционально-метаболическую активность нейтрофилов оценивали по результатам реакции восстановления нитросинего тетразолия [Шубич М.Г., Медникова В.Г. NBT-тест у детей в норме и при гнойно-бактериальных инфекциях // Лаб. дело, 1978. - №1. - С.663-666. Шубич М.Г., Нестерова И.В., Старченко В.М. Тест с нитросиним тетразолием в оценке иммунологического статуса детей с гнойносептическими заболеваниями // Лаб. дело, 1980. - №7. - С.342-344]. Индекс активации нейтрофилов (ИАН) вычисляли согласно инструкции "Риакомплекс" по использованию НСТ-тест набора. Поглотительную способность пейтрофилов (ФП, %, ФИ, у.е., АФ. 10/л) и активность их оксидазных систем (+НСТ, %, ИАН) оценивали в двух состояниях: базальном (баз.) - в свежевзятой крови стабилизированной гепарином, и стимулированном (стим.) - после внесения в пробы крови зимозана, что моделирует условия бактериального заражения и характеризует адаптационные резервы поглотительной и кислородо-зависимой микробицидпой способности нейтрофильпых гранулоцитов. Показатель резерва оксидазной способности нейтрофилов периферической крови (ПР) рассчитывали по [Пахмутов И.А., Ульянова М.С. Оценка функциональной активности нейтрофилов крови животных // Ветеринария, 1984. - №3. - С.68-69].

Кислородонезависимую микробицидность нейтрофилов периферической крови оценивали по содержанию в них катионных белков по методу (Жибинов В.И. Применение лизосомально-катионного теста // Ветеринария, 1983. - №8. - С.30-31], рассчитывая средний цитохимический коэффициент (СЦК) по формуле, предложенной Н.А.Макаревичем [Макаревич Н.А. Лизосомально-катионный тест для оценки уровня резистентности организма крупного рогатого скота // Ветеринария, 1988, - №5. - С.26-28]. Содержание популяции Т-лимфоцитов (Е-РОЛ %) определяли с помощью реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана, В-лимфоцитов (М-РОЛ, %) - с эритроцитами мыши [SU 1090409]. Субпопуляции иммунорегуляторных Т-лимфоцитов, обладающих преимущественно хелнерной (Е-РОЛтр, %) и сунрессорной (Е-РОЛтч) активностью - в тесте с теофиллином [Щегров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. и др. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях (Методология и методические рекомендации). - М.: Медицина, 1989. - 153 с.]. Общий белок определяли рефрактометрически, белковые фракции нефелометрическим методом [Методические указания но применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях. - М.: ВАСХНИЛ, 1981. - 85 с.].

Определение удельной активности Cs в мышцах животных было проведено в ФГА ветеринарной радиологической лаборатории с использованием прибора УСК "Гамма плюс".

Результаты изучения влияния Эпофена на содержание клеток крови и гемоглобина в эритроцитах у молодняка крупного рогатого скота (табл.9 и 10) показали наличие влияния эпофена на лейкоформулу. Отмечена тенденция к менее выраженным "стрессорным" изменениям картины крови у животных опытной группы с эпофеном по сравнению с контрольными животными (на 23% меньше, чем в контрольной группе.)

Таблица 9 Влияние применения эпофена на лейкограмму молодняка крупного рогатого с
Группы	Палочкоядерные нейтрофилы, %	Сегментоядерные нейтрофилы, %	Нейтрофилы, %		Эозинофилы, %	Базофилы, %
Перед началом опыта (п=12)
	0,95±0.18	27,49±1,59		28,44±1.71	8,34±1,22	0,71±0,13
Через 63 суток использования препаратов (n=6)
контроль	0,75±0,18	24,95±4,44		26,20+5,01	3,89±0,27	0,74±0,11
Опыт	0,54±015*	24,40±3,33		24,95±3,28	5,77±1,31*	0,59±0,26
Через 85 суток использования препаратов (n=3)
контроль	4,19±0,23	52,13±3,08		56,33±3,09	1,03±0,44	0,28±0,24
Опыт	4,81±0,31*	51,43±6,11		56,33±4,84	0,25±0,14*	0,11±0,06
Примечание. * - Р<0,05 по отношению к контролю группе.

Таблица 10 Влияние Эпофена на уровень в крови у молодняка крупного рогатого скота лимфоцитов с фрагментированным ядром (% от числа лимфоцитов)
Группы	Количество лимфоцитов с фрагментированным ядром, % от числа лимфоцитов
Перед началом опыта (n=12)
до 0,01
Через 63 суток использования препаратов (n=6)
Контроль	5,10±1,12
Эпофен	2,07±0,26*
Через 85 суток использования препаратов, при убое (n=3)
Контроль	0,74±0,23*
Эпофен	2,01±1,36
Примечание. * - Р<0,05.

Перед началом опыта число лимфоцитов с фрагментированными ядрами было очень низким, через 63 суток опытного периода у всех подопытных животных отмечено значительное увеличение в крови количества лимфоцитов с фрагментированным ядром по сравнению с начальным периодом. По-видимому, это связано с тем, что подопытные бычки перед началом опытного периода (и следующие 2 недели опытного периода) получали зимний рацион, в котором удельная активность радиоцезия в кормовых средствах колебалась от 7±6,5 до 81,74±61 Бк/кг. Удельная активность мышечной ткани животных перед началом опытного периода, измеренная прибором "Сигнал" РСУ-01, колебалась от 0±47 до 59±39 Бк/кг. Затем в рацион животных ввели зеленые корма с более высокой активностью по радиоцезию (300±198 Бк/кг), что и привело, видимо, к увеличению в крови количества лимфоцитов с фрагментированным ядром. При этом использованное биологически активное вещество оказало протективное действие и число патологически измененных лимфоцитов в крови у животных опытной группы было достоверно ниже, чем у контрольных (см. табл.11).

Таблица 11 Удельная активность радиоцезия в мышечной ткани бычков (после убоя)
Показатель	Контрольная группа (п=3), М±т	Опытная группа (п=3), М±т
Удельная радиоактивность, Бк/кг	107,73±11,09	83,13±2,7*
%% к контролю	100	77
Примечание. * - Р<0,05 по отношению к контрольной группе.

Уровень оксидазной активности нейтрофилов крови в базальных условиях у всех подопытных животных перед началом опыта соответствовал значениям, характерным для здоровых животных. Однако, учитывая высокий фагоцитарный показатель нейтрофилов крови, обнаруженный у бычков в базальных условиях (табл.12), это указывает на недостаточность механизмов кислородозависимой микробицидности этих клеток.

Через 63 суток опытного периода у животных контрольной группы оксидазная активность нейтрофилов крови в базальных условиях существенно не изменилась, но адаптационные резервы этой защитной системы достоверно снизились. Об этом свидетельствует уменьшение числа НСТ-позитивных нейтрофилов крови и индекса их метаболической активации (Р<0.05) после внесения в пробы крови зимозана.

Применение эпофена через 63 суток опытного периода способствовало повышению, по сравнению как с контрольной группой, так и с начальным периодом, реактивности кислородозависимой нейтрофильной защитной системы (Р<0,05). У животных, получавших эпофен, установлено достоверное снижение как числа НСТ-позитивных нейтрофилов в крови, так и индекса их активации после внесения в пробы крови зимозана, что показывает активацию оксидазной системы нейтрофилов до максимально возможной (для данных животных) степени уже в базальных условиях.

Кислородонезависимая микробицидность нейтрофилов крови, обеспечиваемая катионными белками (СЦК), у подопытных животных перед началом опыта была достаточно высокой и соответствовала значениям физиологической нормы. У животных, получавших эпофен, установлено более высокое содержание катионных белков в нейтрофилах крови компенсирует низкую кислородозависимую микробицидность этих клеток. Учитывая, что синтез катионных белков является частным случаем синтеза белка в организме и наиболее высокая живая масса в этот период была именно у животных этой группы, эпофен можно рассматривать как вещество, способствующее активизации пооцессов синтеза белка.

Таблица 12 Влияние применения эпофена на иммунный статус (клеточное звено) организма у молодняка крупного рогатого скота
Группы	Е-РОЛ, %	Е-РОЛтр, Vo	М-РОЛ, %	O-лимфоциты, Уо	СОЭ, мм/час
Перед началом опыта (п=12)
	26,42±1,59	31,45±3,96	30,67±2,59	42,92±3,03
Через 63 суток использования препаратов (п=6)
контроль	49,50±2,91	38,50±2,51	31,00±1,15	19,50+3,53	1,50±0,37
Опыт	55,20±2,89*	39,60±3,67	24,80±1,77*	20,00±2,81	0,66±0,14*
Через 85 суток использования препаратов, при убое (п=3)
контроль	45,33±4,91	73,33±2,40	7,33±2,40	47,33±4,41	0,17±0,03
Опыт	46,67±2,67	68,17±2,83*	3,17±0,93*	50,17±2,20	0,15±0,03
Примечание. * - Р<0,05 по отношению к 1 группе.

У подопытных животных перед началом опыта обнаружено сниженное, относительно нормативных значений, содержание Т-лимфоцитов (Е-РОЛ, %), представленных, главным образом, Т-хелнерами (Е-РОЛтр, %), а также повышенный уровень В-лимфоцитов (М-РОЛ, %) и О-лимфоцитов. Через 63 суток под влиянием эпофена у животных отмечено увеличение относительного количества Т-лимфоцитов, оптимизация(снижение) уровня В-лимфоцитов в крови у животных.

Таблица 13 Влияние эпофена на активность глутатионпероксидаз и тиол-дисульфидный статус организма откармливаемых на мясо бычков
Группа	ГГЮ-1	ГПО-2	МДА	Гемоглобин	Низкомолекулярные SH и SS
					Внеклеточные
					SH	SS	ТДС
Контроль	312±48	545±70	2.89±0.41	160.4±10.3	0.547±0.09	0.238±0.06	2,29
Эпофен	460±61	565±68	2.30±0.44	159.3±6.5	0.615±0.04	0.201±0.05	3.06
% к контролю	147	104	80	99	112	84	134
Примечание: ГГЮ-1 - глутатионнероксидаза селенсодержащая, мкм НАДФ окисленного/мин/г гемоглобина, субстрат - перекись водорода; ГПО-2 - глутатионнероксидаза селеннесодержащая (глутатионтрансфераза), мкм НАДФ окисленного/мин/г гемоглобина, субстрат - гидроперекись тетр-бутила; МДА - малоновый диальдегид, мкм/мл плазмы крови; Гемоглобин - грамм/литр крови; SH - низкомолекулярные сульфгидрильные группы (глутатион восстановленный + цистеин), мкм/мл; SS - низкомолекулярные дисульфидные группы (глутатион окисленный + цистин), мкм/мл: ТДС - тиол-дисульфидное соотношение (SH/SS).

Тиолдисульфидное соотношение (ТДС), т.е. отношение сульфгидрильных групп к дисульфидным в сыворотке крови служит важным регуляторным параметром и, одновременно, мобильным диагностическим тестом оценки неспецифической резистентности организма. Оно может наиболее информативно характеризовать «буферную емкость» антиоксидантной системы, как в норме, так и при патологии. Динамика и величина изменений тиол-дисульфидного отношения (тиол-дисульфидной системы) являются отражением развития адаптивной реакции и позволяют непосредственно оценить уровень неспецифической резистентности организма.

Приведенные данные свидетельствуют, что неспецифическая резистентность, буферная емкость антиоксидантной системы и, следовательно, адаптационно-защитные функции у опытных животных были выше, чем у контрольных.

Проведенные исследования показали:

1. По всему изученному комплексу зоотехнических, гематологических и физиолого-биохимических показателей, бычки опытной группы имели преимущество перед контрольной группой.

2. По показателям, характеризующим тиол-дисульфидную и антиоксидантную системы (активность ферментов глутатионпероксидазы и глутатионтрансферазы, концентрация малонового диальдегида, гемоглобина, количество восстановленного и окисленного глутатиона), можно сделать вывод о повышении неспецифической резистентности, буферной емкости антиоксидантной системы и, следовательно, адаптационно-защитных функций у опытных животных в сравнении с контрольными. Введение в рацион эпофена благотворно сказалось на состоянии защитных сил организма животных опытной группы. Особенно рельефные и достоверные изменения в эпофеновой группе отмечены по активности глутатионпероксидазы, величины которой на 47% превосходили значения, присущие контрольным животным. Концентрация малонового диальдегида была на 20% ниже, что подтверждает снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов и торможение процессов избыточного и пагубного образования свободных радикалов, то есть эпофен работает как антиоксидант.

3. Вследствие повышения концентрации низкомолекулярных сульфгидрильных групп на 12% и одновременного снижения на 16% низкомолекулярных дисульфидных групп, тиол-дисульфидное отношение существенно и достоверно повысилось на 34%. Это также подтверждает способность энофена предотвращать окислительный метаболический стресс в организме бычков. Таким образом, анализ этой группы критериев также подтверждает вывод о повышении неспецифической резистентности, буферной емкости антиоксидантной системы и, следовательно, адаптационно-защитных функций у опытных животных в сравнении с контрольными при добавлении к скармливаемому рациону 1 г энофена ежесуточно на протяжении 3 месяцев.

4. По данным изучения концентрации тяжелых металлов: свинца, кадмия, селена, меди, железа и цинка в моче, кале, крови, мышечной ткани, печени и почках подопытных животных выявлены количественные характеристики и специфика изменений, т.е. эпофен в испытанных дозах и продолжительности включения в рацион выступает в качестве агента, снижающего содержание тяжелых металлов в организме откармливаемых бычков.

Пример 11. Воздействие препарата на адаптационные показатели организма.

Показатели, характеризующие энергетический обмен, обмен липидов и антитоксическую активность организма белых нелинейных мышей стандартной массы после 15-дневного введения субстанций препаратов per os ежедневно в дозе 50 мг/кг с помощью дозатора с атравматичным наконечником, представлены в табл.14.

Таблица 14 Влияние состава препарата на показатели функционального состояния адаптационных систем организма
Показатели	Группы животных
	Контроль	Олифен	Эпофен А	Эпохин Н
Масса тела, г	26.1±1.5	26.4±1.1	27.0±1.3	27.2±1.3
Общие липиды, сыворотка, г/л	3.6±0.2	2.9±0.2*	3.1±0.2	3.5±0.2
Холестерин, сыворотка, ммоль/л	1.64±0.44	1.60±0,24	1.62±0.31	1.65±0.32
Билирубин общий, сыворотка, ммоль/л	3.2±0.3	3,0±0.4	2.9±0.2	3.0±0.2
-SHrp, сыворотка, мг%	1610±90	1630±40	1620±70	1650±70
Восстановленный глутатион) печень, мг%	161±8	163±11	164±11	162±11
Гликоген, печень, мг%	2420±100	2400±150	2450±120	2480±120
Глюкоза, сыворотка, мг%	92±10	90±12	89±13	90±13
Глюкоза, мышцы, мг%	145±30	150±10	148±40	150±40
АТФ, сердце, мкмоль/г	2.6±0.1	2.9±0.1	3.0±0.3	2.7±0.2
АТФ, мышцы, мкмоль/г	5.2±0.1	5.5±0.4	5.7±0.1	6.8±0.3*
Интенсивность тканевого дыхания, сердце, мкл 02/100 мг/час	63±5	68±2	69±5	71±6*
Интенсивность тканевого дыхания, мышцы, мкл 0^/100 мг/час	22±4	29±5	30±7	37±6*
* - достоверные отличия от контроля при Р<0.05

Представленные результаты свидетельствуют об адаптационной направленности действия изученных субстанций препаратов, причем по влиянию на тканевое дыхание эффективность заявляемых композиций была выше, чем у зарегистрированного препарата «Олифен».

Пример 12. В клинике гастроэнтерологии и клинике хирургии и отделении челюстно-лицевой хирургии Центральной клинической больнице им. Семашко МПС РФ были испытаны витаминизированные напитки «Цевита», приготовляемые на базе сухой смеси (пакетик весом 20 г растворяют в 200 мл воды), в которую входят витамины С, В ₂, РР, кальций, фосфор, натуральный пектин, а также соки малины, лимона или вишни, а также 5% мас. Эпофен-Н или Эпохин-Н

Распределение больных по нозологии, которым помимо базисной терапии и оперативного вмешательства дополнительно назначался напиток «Цевита», представлено в табл.15.

Таблица 15 Нозология больных, принимавших препарат «Цевита»
Препарат и клиника	Нозология	Число больных
Гастроэнтерология «Цевита с Эпофен-Н»	Язвенная болезнь с локализацией в желудке	3
	Цирроз печень	8
	Хронический рецидивирующий панкреатит	12
	Язвенная болезнь с локализацией в 12-персной кишке	9
Хирургическая патология «Цевита с Эпохин-Н»	Панкреонекроз. Флегмона забрюшинного пространства	5
	Рак головки поджелудочной железы. Механическая желтка	14
	Кишечные свищи	3
	Рак желудка	35
	ЖКБ, хронический калькулезный холецистит	52
Челюстно-лицевая хирургия «Цевита с Эпофен-А»	Воспалительные заболевания челюстно-лицевой области (абсцессы, флегмоны, лимфадениты)	37
	Переломы костей лицевого черепа	15
	Костно-реконструкционные операции на лицевом черепе (остеотомии, костная пластика)	11
Всего		204

Гастроэнтерологическим больным "Цевита-Эпофен" одновременно с базисной терапией назначался при расширении диеты до стола №5 по Певзнеру. Длительность приема препарата составляла не менее 7-ми дней и в течение всей госпитализации, с последующей рекомендацией посезонного курсового 2-недельного приема в качестве адаптогена в виде водного раствора 2-3 раза в день до еды. Керосотропным больным был рекомендован прием препарата при изменениях погодных условий.

Больным хирургического профиля препарат «Цевита-Эпохин»назначался по следующей схеме (в зависимости от объема операции)

Таблица 16 Схема приема напитка «Цевита»
Объем операции	- Назначение в послеоперационном периоде (сутки)	- Длительность приема препарата
Гастрэктомия	4	10 суток
Субтотальпая резекция желудка	4	10 суток
Билиодинестивные анастомозы	3	14 суток
Лапароскопичская холецистэктомия	2	7 суток
Челюстно-лицевая хирургия	3	7 суток три раза в день

Из субъективных показателей: большинство пациентов отмечали улучшение общего самочувствия, комфортность, нормализация аппетита.

Из объективных показателей; у послеоперационных больных отмечена более ранняя нормализация показателей крови и мочи; что напрямую коррелировало с уменьшением длительности и объема вводимых инфузионных растворов. Отмечалась более ранняя активизация больных. У больных, оперированных по поводу механической желтухи, отмечалось раннее нивелирование симптомов эндогенной интоксикации, что проявлялось нормализация биохимических показателей крови.

Больные, оперированные с диагнозом: рак желудка (гастрэктомия или субтотальная резекция желудка), отмечали появление аппетита на вторые сутки после начала приема препарата.

Особую группу онкологических больных составили 26 пациентов, которым перед операцией, в период обследования, давался «Цевита-Эпохин». В дальнейшем прооперированным из них 22-м пациентам в послеоперационном периоде был продолжен на 4-6 сутки после операции прием препарата. При этом как в предоперационном периоде, так и в послеоперационном периоде пациентами отмечено было улучшение аппетита, повышение работоспособности.

При челюстно-лицевой хирургии отмечена более быстрая нормализация показателей, более раннее снижение интоксикации и более быстрое восстановление микроциркуляции в зоне воспалительных процессов.

На основании проведенных исследований можно заключить, что препараты «Цевита» обладает высокой биологической активностью, может с успехом применяться в хирургической практике для лечения на фоне проводимой базисной терапии и хирургического вмешательства как препарат, обладающий общим антиоксидантным, антигипоксическим, иммуномодулируищим, дезагрегантным и стимулирующим эритропоэз у больных с острым панкреатитом, панкреонекрозом, а также в пред- и послеоперационном периоде у больных раком желудка, билиопанкреатодуоденальной зоны и другой хирургической патологии, а также в гастроэнтерологической практике для лечения больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, циррозом печени.

Пример 13. Влияние препарата на сердечно-сосудистую систему

Препарат Эпохин-Н вводился в шоколадную массу перед формированием шоколадного батончика в количестве 0.15% от общего веса. Полученный после формирования шоколадный батончик «Экстрим» весом 35 г содержал 11% белков, 60% углеводов, 19% жиров, 1.5% лактулозы, 1% солей кальция, 0, 15% эпофена, а также витаминные и вкусовые добавки. Было обследовано 20 человек. Оценка выраженности признаков и факторов риска проводилась по бальной системе:

- 5-7 баллов - вероятность коронарного риска «очень низкая»;

- 8-9 баллов - «низкая»;

- 10-12 баллов - «вероятная»;

- более 12 - «высокая».

Из факторов риска было отмечено:

- 1 чел. - ожирение 1-й степени, экзогенно-конституционная форма, ИМТ (индекс массы тела) более 30;

- 3 чел. - избыточная масса тела, ИМТ от 25 до 30;

- 12 чел. - гиподинамия, все исследуемые спортом не занимались, занятия физкультурой нерегулярны;

- 4 чел. - курение;

- 2 чел. - бросивших курить менее одного года.

По результатам обследования четыре человека имели установленные диагнозы: «атеросклероз аорты, атеросклеротический кардиосклероз, начальные проявления атеросклероза сосудов головного мозга» (диагноз подтверждался данными рентгенографии грудной клетки в виде уплотнения аорты, изменениями на ЭКГ (снижение зубца Т, нарушение внутрижелудочковой проводимости, различные блокады, синдром WPW и др.), нарушением липидного обмена).

Кроме вышеперечисленных лиц, еще четыре человека имели изменения липидного обмена в виде повышения уровня холестерина, триглицеридов, липопротеидов низкой плотности. Восемь человек обследуемых имели повышенное артериальное давление, как АДС, так и АДД.

На втором этапе в течение одного месяца испытуемая группа ежедневно принимала по 1-2 батончика «Экстрим-X». По окончании срока исследования всем обследуемым были сделаны контрольные ЭКГ, биохимические анализы крови (липиды, холестерин). В течении месяца ежедневно фиксировалось АД. Анализ полученных результатов показал, что:

- у шести человек летного состава нормализовалась ЭКГ (восстановились зубец Т, улучшилась внутрижелудочковая проводимость);

- у восьми человек испытуемых произошла коррекция нарушений липидного обмена (снижение холестерина, липопротеидов низкой плотности, нормализовался коэффициента атерогенности);

- произошла нормализация и стабилизация АД;

- имевшая место до приема БАД выраженная дисфункция в виде утомляемости, усталости, плохого сна, повышения потливости значительно уменьшилась.

Степень выраженности признаков и факторов риска атеросклероза до и после приема БАД показана в таблице 17

Таблица 17 Влияние приема БАД «Экстрим-X» на степень выраженности признаков и факторов риска атеросклероза
Степень выраженности	Кол-во человек до лечения	Кол-во человек после лечения
очень низкая	1	1
низкая	1	3
вероятная	4	7
высокая	6	1

Пример 14. Влияние препарата на сердечно-сосудистую систему. В поликлинике Летно-испытательного института имени М.М.Громова при проведении функциональных проб в интересах врачебно-летной экспертизы проводились исследования сердечно-сосудистой системы летного персонала.

Для характеристики состояния обследуемого использовался ИН-показатель, наиболее полно отражающий степень напряжения регуляторных механизмов организма, уровень централизации управления кровообращением.

Условный диапазон колебаний значений ИН от 5 до 500 усл.ед.

ИН<30 усл.ед. - ваготония; ИН=30-90 усл.ед - эйтопия; ИН=90-160 усл.ед. - симпатикотопия; ИН>160 усл.ед. - гиперсимпатикотония.

В ходе обследования было выявлено 108 случаев вегетососудистой дистонии: 20 человек с преобладанием ваготонии; 70 человек - с симпатиготонией; 38 человек - с гиперсимпатинотонией.

30 пациентов с проявлениями гиперсимпатикотонии в течение месяца в в дополнение к основному пищевому рациону принимали БАД «Экстрим» 2 раза в день по 1 батончику весом 35 г (БАД представлял собой шоколадную смесь, содержащую 0.15% мас. композиции «Эпофен-Н»).

Анализ опроса летного состава, принимавшего БАД «Экстрим», по субъективной самооценке функционального состояния после завершения цикла приема БАД показал, что 96% пациентов дали положительную оценку предлагаемому средству оптимизации и поддержанию работоспособности. При этом отмечалось снижение внутренней напряженности, уменьшения сонливости и усталости. В процессе использования БАД «Экстрим» отсутствовали аллергические реакции и расстройства пищеварения с приемом предлагаемого средства.

После месячного приема БАД «Экстрим» летному составу, имеющему диагноз - ВСД, проводилась проба с непрерывной ступенчато-возрастающей нагрузкой на велоэргометре (300 кГм, 600 кГм, 900 кГм) с постоянной записью электрокардиограммы, в 12-ти отведениях. При этом определялся тип гемодинамики: эукинетический, гипо- и гиперкинетический, а также адекватность прироста артериального давления (АД) и пульса по отношению к нагрузке. Вычислялся ряд параметров, помогающих ранней диагностике ишемической болезни сердца (ИБС), вегето-сосудистой дистонии (ВСД): двойное произведение (ДП), где ДП=махЧСС×АДсист.мах.×10; индекс энергетических затрат (ИЭЗ), где ИЭЗ=ДП/100×W-, где w - объем выполненной работы на велоэргометре.

При диагностическом затруднении выявления нарушения вегетативной регуляции использовался метод регистрации синусового сердечного ритма - кардиоинтервалография (КИГ) с последующим математическим анализом его структуры. Кардиоинтервалограмма представляет собой непрерывную запись не менее 100 последовательных кардиоциклов (интервалов R-R) в одном из электрокардиографических отведении. Результаты исследований представлены в табл.18.

Таблица 18 Влияние природы пищевой добавки на состояние организма при ВСД
Кол-во пац	ВЭМ		ИН		ДП		ИЭЗ
	До приема	После приема	До приема	После приема	До приема БАД	После приема	До приема БАД	После приема
30	5700 кГм	5700 кГм	160-240 ед	70-90 ед.	270	300	4,5-5.6±0.3	3.6±0,2

Пример. 15. Влияние композиции на состояние вегетативной нервной системы (ВНС) оценивалось на основе применения шоколадных батончиков БАД «Экстрим»

Препарат Эпофен-Н вводился в шоколадную массу перед формированием шоколадного батончика в количестве 0.15% от общего веса. Полученный после формирования шоколадный батончик БАД «Экстрим» весом 35 г содержал 11% белков, 60% углеводов,19% жиров, 1.5% лактулозы, 1% солей кальция, 0, 15% эпофена, а также витаминные и вкусовые добавки.

Испытания проводили на 42 человека летного состава с целью оптимизации их функционального состояния и повышения работоспособности.

Оценка вегетативной дисфункции и степень выраженности осуществлялась по бальной системе: - легкая - 3-5 симптомов, умеренная - 6-10 симптомов, выраженная - более 10 симптомов.

Преобладающий тонус вегетативной нервной системы (ВНС) фиксировался: ваготония - число парасимпатических симптомов превышает число симпатических на 2 и более; симпатикотония - число симпатических симптомов превышает число парасимпатических на 2 и более; нормотония - соотношение числа симпатических и парасимпатических симптомов не превышает единицы.

В течении 12-14 дней исследуемая группа принимала БАД «Экстрим» в виде одного батончика весом 35 грамм в середине выполнения полетных заданий. После завершения программы исследований вновь на каждого исследуемого заполнялась «Анкета состояния вегетативной нервной системы» после приема БАД, на основе которой проводилась оценка состояния ВНС. Полученные результаты приведены в табл.19.

Таблица 19. Влияние приема пищевой добавки на состояние ВГС
Параметр	Показатель	Количество человек
		До приема	После приема
Степень вегетативной дисфункции	Легкая	8	20
	Умеренная	20	14
	Выраженная	14	9
Преобладающий тонус ВНС	Ваготония	26	12
	Симпатикотония	12	10
	Нормотония	4	20

При анализе 42 анкет, заполненных до приема БАД, обращалось внимание на изменения со стороны центральной гемодинамики в сторону развития гиподинамических проявлений - снижение активности сердечной деятельности (уменьшение ЧСС и ИН), сопровождающееся уменьшением минутного объема крови и, как следствие, снижением АДС и ростом АДД, снижением ЧДД и ТТ.

То есть наблюдается снижение общего вегетативного тонуса и энергетических процессов, преобладает выраженная степень вегетативной дисфункции, а преобладающим тонусом вегетативной системы является ваготония.

Анализ анкет по оценке субъективного состояния до использования БАД показал, что:

- 50% исследуемых имели нарушения сна в виде затрудненного засыпания и тревожного сна с частыми просыпаниями;

- 35% - отмечали изменение цвета лица (бледный или покраснение, усиленный сосудистый рисунок);

- 20% имели различные аллергические реакции;

- 60% имели выраженное потоотделение или, наоборот, сухость кожи;

- 70-80% ощущали общую слабость, утомляемость, внутреннее напряжение, подавленность или немотивированное беспокойство.

После двухнедельного приема БАД «Экстрим» большинство принимавших указали на улучшение их общего состояния, нормализацию сна, настроения, повышения работоспособности, внимания, оперативной памяти. А также уменьшился гипергидроз, улучшился цвет лица.

В параметрах центральной гемодинамики (ЧСС, ИН, АДС, АДД) и энергетического обмена (ЧДД, ТТ) произошла длительная стабилизация в сторону нормализации, в результате чего изменилась степень вегетативной дисфункции - стала преобладать легкая, а преобладающим тонусом ВНС стала нормотония.

Таблица 20 Влияние приема препарата на состояние СНС
Показатель	До полета		После полета
	Опыт	Контроль	Опыт	Контроль
Систолическое артериальное давление (АДС)	135	140	120	105
Диастолическое артериальное давление (АДД)	90	90	70	86
Частота дыхательных движений (ЧДД)	18.5	19.5	17	13
Температура тела (ТТ)	36.8	36.9	36.5	36.0
Частота сердечных сокращений (ЧСС)	80	92	68	54
Индекс напряжения	75	128	44	34

Если перед полетом прослеживалось слияние симпатической нервной системы как ответ на экстремальную ситуацию, то прием препарата в процессе полета способствует восстановлению физиологических параметров до нормального уровня, что не наблюдалось в контрольной группе, где преобладали явления снижения вегетативного тонуса и энергетического обмена.

Таким образом, СМРП препятствует снижению уровня активности физиологических функций кардиореспираторной системы, общего вегетативного тонуса и обеспечивает интенсификацию энергетических процессов, что очень важно в летной работе при необходимости экстренных действий.

Такая стабилизация общего вегетативного тонуса при использовании БАД «Экстрим» связана с активизацией центральных регуляторных механизмов вегетативной нервной системы, оксигенации, тканевого дыхания функциональными компонентами БАД.

Пример 16. Влияние препарата на иммунную систему организма. Клинические испытания ЭПОФЕН-А на больных с гнойной хирургической инфекцией проводились в отделении гнойной хирургии Центральной клинической больницы им. Н.А.Семашко МПС РФ на базе кафедры хирургических болезней и новых эндохирургических технологий Московского государственного медико-стоматологического института.

Эпофен применялся в виде порошка по 0,5 г для перорального применения. Курс лечения составлял 10 суток.

При поступлении всем больным выполнялось обследование по общепринятой схеме, назначалось комплексное лечение, направленное на нормализация обменных процессов и гомеостаза, коррекцию иммунного статуса, разрешение перифокальных воспалительных изменений в тканях, очищение раны и ее заживление. Лечение проводилось в комплексе с уже зарекомендовавшими себя методами - обработкой поверхности язв (ран) низкочастотным ультразвуком, вакуумированием, этапными механическими некрэктомиями и обработкой ран и окружающих тканей инфракрасным лазерным излучением. При этом проводилось сравнительное исследование эффективности эпофена по результатам лечения репрезентативных групп больных по площади и глубине язв (ран), выраженности перифокального воспаления и выраженности расстройств микроциркуляции. Эпофен применялся при лечении 67 больных в возрасте от 22 до 85 лет, из них 39 женщин и 28 мужчин, которые составили основную группу. Группа сравнения составила 70 больных, лечение которых осуществлялось традиционными методами.

51 (76,1%) больному в день поступления или после краткой предоперационной подготовки выполнялась хирургическая обработка гнойно-некротического очага. В дальнейшем этапные некрэктомии были выполнены 10 больным. Местное лечение осуществлялось с использованием комбинации иммобилизированных ферментов и 0,5% раствора гипохлорита натрия, обработкой ран низкочастотным ультразвуком, низкочастотным лазерным излучением.

Анализ объективных данных в исследуемых группах показал следующее. В основной группе симптомы интоксикации купировались на 2,1-1,3 сутки (группа сравнения - на 4,1±1,4 сутки), нормализация температурного градиента происходила на 4,4±1,5 сутки (группа сравнения - на 5,5±2,1 сутки), очищение раны на 8,9±1,7 сутки (группа сравнения - на 12,6±1,8 сутки), выписка домой на 12,3±1,3 сутки (группа сравнения - на 16,4±1,2 сутки).

Исследование лабораторных показателей крови до и после назначения препарата выявило повышение уровня гемоглобина на 11±0,8 г/л у 52 (77,6%) больных в основной группе. В группе сравнения отмечено снижение уровня гемоглобина в среднем на 6±1,3 г/л у 28 (40%) больных.

Отмена антибактериальных препаратов в основной группе осуществлялась на 5,1±1,3 сутки, в то время как в контрольной группе на 8,31±1,1 сутки.

Исследование иммунного статуса выявило, что на 10 сутки лечения количество Т-лимфоцитов у больных основной группы достигло показателя нормы (64,1±1,1%), отмечено увеличение количества Т-хелперов (57,5±1,1%) и снижение уровня Т-супрессоров (7,2±1,5%). У больных контрольной группы количество Т-лимфоцитов было ниже (56,4±1,7%); количество Т-хелперов составило 53,4±1,4, а количество Т-супрессоров - 9,9±1,8%.

Таким образом, по данным иммунологического обследования больных выявлен выраженный иммуномодулирующий эффект после проведенного лечения эпофеном у больных основной группы по сравнению с контрольной группой.

Оценка степени токсемии осуществлялась по показателям лейкоцитарного индекса интоксикации с помощью формулы Я.Я.Кальф-Калифа. Оценка степени токсемии выявила полную нормализацию индекса лейкоцитарной интоксикации у 58 (86,6%) больных основной подгруппы (1,00 усл. ед.), в то время как сохраняющийся в среднем на уровне 1,42±0,21 усл.ед. показатель индекса лейкоцитарной интоксикации в группе сравнения у 64 (91,4%) свидетельствовал о сохранении синдрома эндогенной интоксикации.

Аллергических реакций, побочного действия эпофена в процессе исследования выявлено не было. Противопоказаний к применению препарата не выявлено.

Включение эпофена в комплексную терапию больных с абсцессами и флегмонами различной локализации, инфицированными ранами обеспечивает воздействие на основные механизмы развития заболевания и оказывает положительный эффект на гуморальный и клеточный иммунитет, повышение неспецифической резистентности, течение репаративных процессов. Комплексная терапия с применением эпофена позволяет сократить продолжительность курса антибактериальной терапии на 3,2 суток и, таким образом, расход дорогостоящих антибактериальных препаратов, а срок стационарного лечения - на 4,1 сутки.

Проведенные исследования показали, что заявляемая композиция оказывает широкое позитивное воздействие на жизнедеятельность организма, в частности является перспективным радиопротектором и противораковым препаратом.