способ размножения гладиолуса in vitro

Формула изобретения

Способ размножения гладиолуса in vitro, включающий вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты, отличающийся тем, что после вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, с 1/4 концентрации макро- и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С, затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л -нафтилуксусной кислоты, кроме того, параллельно культивирование проводят также через каллусогенез на агаризованной питательной среде, дополненной 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксуной кислоты, с последующим укоренением на агаризованной питательной среде с половинной концентрацией солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 0,5-1,5 мг/л -нафтилуксусной кислоты, 30-40 г/л сахарозы и 4-5 г/л активированного угля.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области цветоводства и может быть использовано для микроразмножения и оздоровления растений гладиолуса in vitro.

Известен способ микроразмножения гладиолуса, включающий вычленение экспланта, посадку его на питательную среду, культивирование, разделение на сегменты (SU №1695854, МПК 7 А 01 Н 4/00, 07.12.1991 г.).

Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения на разных этапах культивирования.

Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения интенсивности побегообразования, улучшения роста и развития эксплантов при положительном влиянии оптимальной концентрации минерального и органического питания регуляторов роста.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе размножения гладиолуса in vitro, включающем вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты, после вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с 1/4 концентрации макро - и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. Затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л -нафтилуксусной кислоты, кроме того, параллельно культивирование проводят также через каллусогенез на агаризованной питательной среде, дополненной 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, с последующим укоренением на агаризованной питатальной среде с половинной концентрацией солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 0,5-1,5 мг/л -нафтилуксусной кислоты, 30-40 г/л сахарозы и 4-5 г/л активированного угля.

Добавление сахарозы в питательную среду более 40 г/л снижает рост и развитие эксплантов.

При 1/4 концентрации макро- и микросолей и интенсивности освещения 3000-3500 лк при температуре 22-24°С наблюдается наибольшее образование побегов эксплантов гладиолусов (табл.1).

Добавление в питательную среду регуляторов роста с концентрациями 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л -нафтилуксусной кислоты, 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты наиболее оптимально для роста эксплантов гладиолусов и не вызывает токсического действия (табл.2, 3).

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве эксплантов берут пазушные и апикальные почки гладиолуса, стерилизуют и в стерильных условиях высаживают в колбы на питательную среду Мурасиге-Скуга с рН 5,8-5,9, содержащую 7,0-7,5 г/л агара. Для экспериментальной проверки предлагаемого способа на этапе введения в культуру варьируют концентрацию макро- и микросолей в питательной среде (табл.1).

Таблица 1
Концентрация минеральных солей по прописи Мурасиге-Скуга(часть)	Побегообразование, штук/эксплант
1	3,7±0,3
1/2	3,3±0,3
1/4	4,6±0,8
1/8	2,5±0,1

Культивирование проводят при постоянном освещении белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. В течение 3-4 недель культивирования на среде с 1/4 концентрации макро- и микросолей по прописи Мурасиге-Скуга образуется максимальное число побегов, которые отделяют от почки и пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга для последующего микроразмножения. На этапе собственно микроразмножения субкультивирование побегов проводят на среде, содержащей 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста: 0,5-1,5 мг/л 6-бензиламинопурином и 0,5-1,5 мг/л -нафтилуксусной кислотой (табл.2).

Таблица 2
Побегообразование	Концентрация, мг/л
	6-бензиламинопурин
	0,5			1,0			1,5
	-нафтилуксусная кислота
	0,5	1,0	1,5	0,5	1,0	1,5	0,5	1,0	1,5
Количество, штук	14,2±0,5	12,5±0,5	8,3±0,2	5,5±0,1	4,3±0,4	3,5±0,3	2,1±0,2	2,0±0,2	1,5±0,3

Наряду с прямой регенерацией растений из первичного экспланта на данном этапе процесса клонального микроразмножения регенерацию растений проводят также через каллусогенез, для чего в питательную среду добавляют 0,5-1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (табл.3).

Таблица 3
Побегообразование	Концентрация, мг/л
	6-бензиламинопурин
	0,5			1,0			1,5
	2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота
	0,5	1,0	1,5	0,5	1,0	1,5	0,5	1,0	1,5
Количество, штук	15,3±0,3	17,5±0,4	15,6±0,6	12,4±0,5	12,6±0,6	9,4±0,2	-	-	-

Укоренение проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга с 1/2 концентрации минеральных солей, дополненной 30-40 г/л сахарозы, 0,5-1,5 мг/л -нафтилуксусной кислоты, 4-5 г/л активированного угля. После укоренения размноженные растения переносят в почву и выращивают обычным способом.

В результате использования данного способа клонального микроразмножения гладиолуса величина побегообразования на этапе введения в культуру in vitro составила 4,6 побега/эксплант, на этапе собственно микроразмножения - от 14,2 (через пассирование пазушных побегов) до 17,5 побегов/эксплант (через каллусогенез). Процент укоренения составил 100%, что приводит к высокой жизнеспособности растений-регенерантов при последующей высадке в почву.