способ лечения невынашивания беременности

Формула изобретения

Способ лечения невынашивания беременности путем исследования пробы периферической крови, в которой определяют уровень CD 56+ клеток и при их содержании выше нормы проводят курсы лимфоцитоиммунотерапии (ЛИТ) донорскими лимфоцитами, затем с момента установления беременности ЛИТ повторяют, отличающийся тем, что дополнительно проводят ЛИТ на 5-6 день фертильного цикла до восстановления нормальных показателей уровня CD 56+ лимфоцитов, а с момента установления беременности ЛИТ проводят по результатам УЗИ, причем при наличии гипоплазии хориона - каждые 2 недели, а при соответствии толщины хориона гестационному возрасту - каждые 3-4 недели до 12-14 недель беременности.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и касается способа лечения женщин с осложненным репродуктивным анамнезом.

Среди множества причин, лежащих в основе раннего прерывания кариотипически нормальной беременности, выделяют форму, связанную с повышенным содержанием лимфоцитов в периферической крови с фенотипом CD56⁺, а также в эндометрии и децидуальной ткани (1, 2, 3). Кроме цитолитических функций в децидуальной ткани данный тип натуральных киллерных клеток (CD56⁺ ) способен синтезировать ряд провоспалительных цитокинов (в первую очередь фактор некроза опухоли альфа). В результате повышенной активности СD56-позитивных клеток нарушаются процессы имплантации, происходит повреждение клеток плаценты, развивается децидуальный некроз(4).

Известен способ лечения (5) данной патологии с использованием лимфоцитоиммунотерапии (ЛИТ). При этом рекомендуется использовать клетки мужа (отца будущего ребенка), проводить ЛИТ с момента установления беременности и каждые 5-7 недель до 10-12 недель беременности без учета особенностей развития хориона и плаценты по данным УЗИ. Beer A.E. с соавторами (6) считают, что для нормального лечения беременности уровень CD56⁺ лимфоцитов не должен превышать 12%, а при уровне данных клеток 18% и более рождение жизнеспособного потомства невозможно.

Недостатком данного способа является то, что используются лимфоциты мужа без учета возможности совместимости супругов по антигенам гистосовместимости. С момента установления беременности ЛИТ проводят без контроля за динамикой развития хориона и плаценты по результатам УЗИ.

Задача изобретения заключается в нормализации содержания CD 56⁺ лимфоцитов, что способствует адекватному развитию хориона и плаценты.

Поставленная задача решается предлагаемым способом. Способ заключается в исследовании проб периферической крови, в которой определяют уровень CD56+ лимфоцитов и при их содержании выше нормы проводят от 1 до 4 процедур ЛИТ донорскими лимфоцитами, затем повторяют ЛИТ с момента установления беременности, дополнительно проводят ЛИТ на 5-6 день предполагаемого фертильного цикла, до восстановления нормальных показателей уровня CD56+ лимфоцитов (до 4-8%), причем с момента установления беременности ЛИТ проводят по результатам УЗИ при наличии гипоплазии хориона каждые 2 недели и при соответствии хориона гестационному возрасту - каждые 4 недели до 12-14 недель беременности.

Донорами лейкоцитов периферической крови являются здоровые как мужчины, так и женщины в возрасте от 20 до 40 лет, прошедшие проверку на отсутствие СПИДа, сифилиса, гепатита, не имеющие на день сдачи крови изменений в биохимическом составе крови.

Забор крови в объеме 50 мл производят из локтевой вены в 50-миллилитровые пластиковые стерильные флаконы, содержащие гепарин (5 ЕД на 1 мл крови). Флаконы выдерживают 2 часа в вертикальном положении при 37°С. Надосадочную лейкоцитарную массу (10-15 мл) переносят в центрифужные 15-миллилитровые пробирки и центрифугируют при 150 g в течение 10 минут. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок клеток ресуспендируют в течение 20-30 секунд в 3 мл дистиллированной воды. К суспензии клеток добавляют 10-12 мл физиологического раствора и клетки осаждают центрифугированием. Процедуру лизиса эритроцитов проводят 3-4 раза до их исчезновения. Очищенную суспензию лейкоцитов растворяют в 2 мл физиологического раствора. Введение клеток проводят внутрикожно в 10-12 точек наружной части предплечья.

Отличительными признаками предлагаемого способа следует считать использование донорских лейкоцитов для ЛИТ, проведение ЛИТ на 5-6 день предполагаемого фертильного цикла, до восстановления нормальных показателей (4-8%) уровня CD+ лимфоцитов, во время беременности периодичность процедур ЛИТ определяется показателями УЗИ.

Данные признаки позволяют добиваться адекватного развития хориона и плаценты при нормализации содержания СD56-позитивных клеток.

Для раскрытия сущности изобретения ниже приведены примеры и результаты клинико-лабораторных исследований предлагаемого способа.

Изучение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови до и после проведения курсов ЛИТ.

Таблица 1 Относительное содержание основных клеточных популяций в периферической крови женщин с осложненным репродуктивным анамнезом (%).
Кластер дифференцировки (CD)	До проведения ЛИТ (n=30)	После проведения ЛИТ (n=30)	Контрольная группа (n=20)
3	62,2+2,8	69,3+3,2	70,3+3,5
4	37,5+3,0	38,1+3,3	42,4+1,0
8	24,4+2,7	24,6+3,1	28,2+2,8
4/8	1,6+0,1	1,6+0,1	1,7+0,1
19	5,9+0,3	5,7+0,2	5,5+0,3
16	10,0+1,7	10,2+2,0	10,6+1,7
56	16,2+2,6	5,2+1,3*	3,9+0,7
р<0,05 после проведения ЛИТ

Вывод: после проведения ЛИТ происходит нормализация относительного содержания клеток периферической крови с фенотипом CD56+, что способствует адекватному развитию хориона и плаценты.

1. Исследование влияния ЛИТ на состояния хориона.

Таблица 2 Динамика изменения толщины хориона и плаценты (методом УЗИ) на фоне проведения ЛИТ
Толщина хориона (см)	Гестационный возраст (нед.)
	6-7	8-9	10-11	12-14
1. Беременные с гипоплазией хориона (n=30)	0,31+0,02 P2-1<0,05	0,49+0,03 P2-1<0,05	0,81+0,04 P2-1>0,05	1,1+0,05 P2-1>0,05
2. Здоровые беременные (n=20)	0,50+0,04	0,75+0,05	0,93+0,05	1,2+0,06

Вывод: несмотря на нормализацию субпопуляционного состава лимфоцитов до наступления беременности, в последующем возможно развитие гипоплазии хориона.

Проведение ЛИТ в данной ситуации имеет высокую эффективность, что выражается в выравнивании толщины хориона начиная с 10-11 недель.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Больная Д., 24 года, В анамнезе 1 искусственный аборт, 1 неразвивающаяся беременность в 12-13 недель. Из гинекологических заболеваний отмечался аденомиоз, внутриматочная перегородка (проведена резектоскопия). При обследовании вне беременности уровень CD56+ в периферической крови составил 12%. Проведено 2 курса ЛИТ с интервалом в 3 недели. Перед наступлением беременности содержание CD56+ составило 5,7%. На 5 день цикла проведена ЛИТ. Во время беременности в динамике проводилась УЗИ:

1. В сроке 5 недель, толщина хориона 0,2 см, хорион кольцевидный, проведена ЛИТ.

2. В сроке 8 недель 2 дня, толщина хориона 0,6 см, хорион кольцевидный, проведена ЛИТ.

3. В сроке 14 недель, толщина плаценты 1,4 см, плацента по передней стенке.

4. В сроке 18-19 недель, толщина плаценты 1,7 см, плацента по передней стенке. Далее беременность протекала без осложнений. Роды через естественные родовые пути в сроке 39 недель, родилась девочка массой 3300 г, рост 50 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Течение послеродового и раннего неонатального периодов без осложнений.

Пример 2

Больная К., 34 года. В анамнезе 2 неразвивающиеся беременности в 5 недель. Патоморфологическое исследование абортного материала - атрофия ворсин хориона, дистрофические и некротические изменения в децидуальной ткани. Гинекологические заболевания отсутствуют. При обследовании вне беременности содержание CD56+ в периферической крови 9,3%. Проведено 2 курса ЛИТ с интервалом в 3 недели. Перед наступлением беременности уровень CD56+ составлял 6,1%. На 6 день цикла проведена ЛИТ. Во время беременности в динамике производилась УЗИ:

1. В сроке 4 недели проведена ЛИТ.

2. В сроке 7,5 недель - хорион кольцевидный, толщина хориона 0,4 см, проведена ЛИТ.

3. В сроке 8 недель 4 дня - хорион кольцевидный, ширина 0,8 см, расположен по передней стенке, имеется участок отслоения 1,6×0,3×1,3 см без наружного кровотечения, проведена ЛИТ.

4. В сроке 12 недель - плацента толщиной 1,6 см по передней стенке, доходит до области внутреннего зева.

5. В сроке 17 недель - плацента толщиной 1,8 см по передней стенке, доходит до области внутреннего зева.

Далее беременность протекала без осложнений. Родоразрешена путем операции кесарева сечения в 38 недель. Родился мальчик массой 3700 г., рост 52 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Течение послеоперационного и раннего неонатального периодов без особенностей.

Пример 3

Больная А., 33 года. В анамнезе 2 искусственных аборта, 3 неразвивающиеся беременности в 9, 6, 6 недель. Гинекологические заболевания: хронический аднексит, аденомиоз. Вне беременности содержание CD56+ в периферической крови 14%. Проведено 2 курса ЛИТ с интервалом 3 недели, уровень CD56+ составил 7,2%. На 5 день цикла проведена ЛИТ. Во время беременности УЗИ в динамике:

1. В срок 5-6 недель, хорион кольцевидный, толщина 0,2 см, проведена ЛИТ.

2. В срок 8 недель 3 дня, хорион в дне матки с переходом на заднюю стенку, толщина 1 см, имеется участок отслойки хориона 1,2×0,5 см, без наружного кровотечения, проведена ЛИТ.

3. В сроке 15 недель, плацента по средней стенке 0-1 степени зрелости, толщина плаценты 2,3 см.

Беременность осложнилась развитием плацентарной недостаточности. Родоразрешена путем операции кесарева сечения в 39 недель. Родился мальчик массой 3500 г, рост 49 см, с оценкой по шкале Апгар 8/8 баллов. Течение послеоперационного и раннего неонатального периодов без осложнений.

Пример 4

Больная Г., 24 года. В анамнезе: 1 неразвивающаяся беременность в 6 недель. Гинекологические заболевания - гиперандрогения, эрозия шейки матки. Вне беременности содержание CD56+ составило 9,5%. Проведено 2 курса ЛИТ с интервалом в 3 недели. Уровень CD56+ снизился до 6,1%, на 6 день цикла проведена ЛИТ. УЗИ в динамике беременности:

1. В сроке 5 недель 2 дня хорион кольцевидный, толщина 0,3 см, проведена ЛИТ.

2. В сроке 7 недель 6 дней, хорион по задней стенке матки, толщиной 0,7 см, проведена ЛИТ.

3. В сроке 12 недель, плацента по задней стенке матки, толщиной 1,3 см.

Далее беременность протекала без осложнений. Роды через естественные родовые пути. Родилась девочка весом 3700 г, рост 56 см, с оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов. Течение послеродового и раннего неонатального периода без осложнений. Результаты проведенных исследований, в сравнении с литературными данными (прототип), позволяют сделать вывод, что предлагаемый способ обладает следующими преимуществами:

1. Использование донорских клеток для ЛИТ сводит к минимуму вероятность совместимости по антигенам HLA.

2. Использование ЛИТ на 5-6 день предполагаемого фертильного цикла создает оптимальный иммунологический фон предстоящей беременности.

3. ЛИТ высокоэффективна при наличии гипоплазии хориона в 1 триместре беременности. Периодичность проведения ЛИТ определяется показателями состояния хориона (по данным УЗИ).

Таким образом, предлагаемый способ значительно повышает эффективность лечения невынашивания беременности и позволяет в комплексе с традиционными методами добиться рождения жизнеспособного потомства в 95% случаев.

Источники информации

1. Clifford R., Flanagan A.M., Regan L. Endometrial CD56+ natural killer cell in women with recurrent miscarriage: a histomorphometric study // Hum.Reprod. - 1999. - Vol.14. - №11. - P.2727-2730.

2. Yamamoto Т., Takahashi Y., Kase N., Mori H. Decidual natural killer cell in recurrent spontaneous abortion with normal chromosomal content // Am.J.Reprod. Immunol. - 1999. - Vol.41. - №5. - P.337-242.

3. Coulam C.B,, Godman C., Roussev R.G., Sistemic CD56+ cells can predict pregnancy outcom // Am.J.Reprod.Immunol. - 1995. - №33. - P.219-222.

4. Hill J.A., Choi B.C. Maternal immunological aspects of pregnancy success and failure // J of Repr. And Fert.Suppl. - 2000. - №55. - P.91-97.

5. Beer A.E., Kwak J.Y.H. Reproductive Medicine Program. Finch University of Health Science. - Chicago Medical School, 2000.

6. Beer A.E., Kwak J.Y.H. Peripheral blood lymphocyte in women with recurrent pregnancy loss // Clin.Immunol. - 1996. - №15. - p.37-39.