способ культивирования h. influenzae из носоглоточной слизи (варианты)

Формула изобретения

1. Способ культивирования H. mfluenzae из носоглоточной слизи на питательной среде, содержащей агар из вареной крови, отличающийся тем, что питательную среду перед посевом исследуемого материала охлаждают до 45^oС и добавляют раствор ристомицина до конечной концентрации 20 ед. на 1 мл питательной среды.

2. Способ культивирования H. mfluenzae из носоглоточной слизи на питательной среде, содержащей агар из вареной крови, отличающийся тем, что на агар после посева исследуемого материала накладывают диски с ристомицином, содержащие 30 мг ристомицина.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения H.influenzae из носоглоточной слизи.

H.influenzae - микроорганизм, вызывающий тяжелые инфекционные заболевания у детей и взрослых. Возбудитель находится на слизистой носоглотки.

Известен способ культивирования роста H.influenzae, например на питательной среде - агар Левинталя из вареной крови (Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии, М., Медгиз, 1950, с.92-93).

Однако H. influenzae формирует очень мелкие колонии, трудно дифференцируемые от других колоний бактерий, находящихся в носоглотке человека, поэтому небольшое количество H.influenzae трудно изолировать и при посеве на обычной питательной среде невозможно выделить.

Техническая задача - повышение выхода H.influenzae для обнаружения минимального количества возбудителя решается следующим образом.

1. Способ культивирования H.influenzae из носоглоточной слизи на питательной среде, содержащей агар из вареной крови, согласно изобретению, перед посевом питательную среду охлаждают до 45^oС и добавляют раствор ристомицина до конечной концентрации 20 ед. на мл питательной среды.

2. Способ культивирования H.influenzae из носоглоточной слизи на питательной среде, содержащей агар из вареной крови, согласно изобретению, на приготовленный агар после посева исследуемого материала накладывают диски с ристомицином, содержащие 30 мг ристомицина.

Ристомицин относится к антибиотикам, к которым резистентны гемофильные бактерии, рост же других бактерий подавляется. Исследуя влияние ристомицина на бактерии H. influenzae авторы выявили, что H.influenzae, все его штаммы полученные из национальной коллекции ГИСК им. Тарасевича (H.influenzae ATCC 94505/81"b", 11/64"b", ATCC10/63"f", ATCC5/63"a", ATCC27/63"d", ATCC8/63"d", ATCC9/64"e", ATCC52/64"e", ATCC7/63"c") и штаммы, изолированные от больных, резистентны к ристомицину при концентрации 20 ед. на мл среды, а рост находящихся в носоглотке грампозитивных кокков подавляется. Охлаждение агара до 45^oС перед добавлением раствора ристомицина является оптимальным для его равномерного распределения в среде. Сравнительная оценка результатов исследования (n= 158) доказала, что при культивировании H.influenzae на питательной среде с ристомицином выделяется штаммов H.influenzae больше, чем при культивировании на обычной среде "агар Левинталя из вареной крови" на 231,9%. Ристомицин не влиял на образование капсулы бактерий, размеры колоний и окраску выделенных бактерий (по методу Грама). Статистическую обработку полученных данных осуществляли по достоверности различий (Бейли В.И., Статистические методы в биологии, М., Мир, 1964, 271 с.).

Культивирование H.influenzae из носоглоточной слизи осуществляют следующим образом.

Готовят основу среды по Левинталю из стерильного питательного агара с рН 7,3-7,6, охлаждают до 60^oС, добавляют, медленно встряхивая и смешивая, 10% к объему агара свежевзятой дефибринированной крови. Кровь добавляют в 5-6 приемов. Смесь ставят на кипящую водную баню и прогревают в течение 5 минут, постоянно взбалтывая (Ю.А. Козлов, Питательные среды в медицинской микробиологии, Агар Левинталя из вареной крови, М., 1950, с. 92-93). Затем, по первому варианту, флаконы с приготовленной основой среды охлаждают на воздухе до 45^oС и вносят в него раствор ристомицина, до конечной концентрации 20 ед. на мл среды. Сразу разливают в чашки Петри по 17-20 мл. Разведенный ристомицин можно хранить в холодильнике при температуре минус 20^oС и после размораживания использовать один раз. Приготовленную питательную среду контролируют на стерильность и используют для посева H.influenzae.

По второму варианту - приготовленный по Левинталю агар разливают в чашки Петри, после застывания осуществляют посев исследуемой носоглоточной слизи и накладывают на агар диски с ристомицином в количестве 30 мг (диски с ристомицином выпускаются промышленностью), В процессе растворения ристомицина его конечная концентрация составляет 20 ед. на мл среды.

Выделение чистой культуры H.influenzae осуществляют общепринятыми методами (например, согласно приказу МЗ СССР 535 от 1985 г.).

Таким образом, заявляемый способ позволяет обнаружить бактерии H.influenzae в носоглоточной слизи даже при небольших количествах.