производные мурамовой кислоты

Классы МПК:C07K9/00 Пептиды, содержащие до 20 аминокислот с сахаридными радикалами и полностью определенной последовательностью; их производные
A61K38/14 пептиды, содержащие сахаридные радикалы; их производные
A61P37/02 иммуномодуляторы
Автор(ы):, , , ,
Патентообладатель(и):Калюжин Олег Витальевич (RU),
Шкалев Михаил Владимирович (RU),
Нелюбов Михаил Владимирович (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2000-09-20
публикация патента:

Изобретение относится к соединениям формулы (1), где Х - С120-алкил, за исключением Х - бутил, гептил или гексадецил, или С39-циклоалкил, незамещенный или замещенный С13-алкилом, или адамантил, незамещенный или замещенный С13-алкилом, или С612-арил, незамещенный или замещенный одним или тремя С13-алкилами. Соединения обладают высокой иммуномодулирующей активностью и высокой биологической доступностью. 2 табл.

производные мурамовой кислоты, патент № 2181729

Рисунки к патенту РФ 2181729

Рисунок 1, Рисунок 2

Изобретение относится к новым производным мурамовой кислоты, которые могут найти применение в народном хозяйстве, в частности в медицине.

Среди большого числа эндогенных и экзогенных иммуномодуляторов известны и производные мурамовой кислоты, например, N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамин (мурамилдипептид, или МДП) (Ellouz E., Adam A., Cioburi R. & Lederer E. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1974. - Vol. 59. - P. 1317-1325).

Известно, что мурамилдипептид способен активировать основные звенья иммунитета, в частности, противоопухолевого ответа. Однако, обладая высокой гидрофильностью, он быстро выводится из организма и является высоко пирогенным.

Известно и другое производное мурамовой кислоты -производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-гептилгликозид-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутамин (производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-гептилгликозид-МДП), обладающее свойствами иммуномодулятора (Калюжин О.В., Караулов А.В. // В книге "Успехи клинической иммунологии и аллергологии" под ред. А.В. Караулова. - 2000. - Т.1. - С. 252-258).

Указанное амфифильное соединение активирует основные звенья иммунитета и стимулирует противоопухолевый иммунный ответ, эффективнее немодифицированного МДП.

Недостатком этого производного является его сравнительно невысокая иммуномодулирующая активность.

Задача изобретения - создание новых производных мурамовой кислоты, обладающих более высокой иммуномодулирующей активностью и большей биологической доступностью при разных формах введения.

Указанная задача решается производными мурамовой кислоты общей формулы

производные мурамовой кислоты, патент № 2181729

где Х - C120-алкил, за исключением Х - гептил или гексадецил,

или С39-циклоалкил, незамещенный или замещенный C13-алкилом,

или адамантил, незамещенный или замещенный C13-алкилом,

или С6-C12-арил, незамещенный или замещенный одним или тремя C13-алкилами.

Указанные соединения могут быть получены, в частности, последовательным гликозилированием спиртов или фенолов в присутствии соответственно иодида ртути или гидроксида натрия и тетраалкиламмоний хлорида, деацетилированием метанолом в присутствии каталитического количества метилата натрия, изопропилиденированием 2,2-диметоксипропаном, алкилированием S-2-бромпропановой кислотой в присутствии гидрида натрия, конденсацией с трифторацетатом бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина N-оксисукцинимидным методом, кислотным гидролизом изопропилиденовой группы и каталитического гидрогенолиза бензилового эфира.

Нижеследующие примеры иллюстрируют синтез соединений по изобретению и их биологическую активность.

Общие методики синтеза

Гликозилирование в присутствии Hgl2.

К раствору 2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-0-глюкопиранозилхлорида (1) в сухом дихлорэтане (25 мл/г) добавили 1,16 экв. иодида ртути (II) и 1 экв. спирта. Реакционную смесь перемешивали в присутствии молекулярных сит 0,3 нм до исчезновения гликозил-донора (контроль ТСХ в системе хлороформ - бензол - этанол, 10:1:1). Молекулярные сита и катализатор отфильтровали, фильтрат разбавили хлороформом, промыли раствором тиосульфата натрия и водой. Органический слой отделили, осушили безводным Na2SO4 и упарили. Остаток очищали кристаллизацией или колоночной хроматографией.

Дезацетилирование

К раствору ацетата в сухом метаноле (10 мл/г) добавили 0,01-0,05 экв. 0,1 н. раствора метилата натрия в метаноле, выдержали 12-24 ч. Раствор нейтрализовали катионитом КУ-2 (Н+), смолу промыли метанолом и фильтрат упарили.

Изопропилиденирование

К раствору триола в диоксане или тетрагидрофуране (50 мл/г) при нагревании до 60oС, добавили 3 экв. 2,2-диметоксипропана и 10-20 мг сухой TsOH. Через 1 ч (контроль ТСХ в системе хлороформ - этанол, 15:1) реакционную смесь нейтрализовали пиридином и упарили. Остаток растворили в 50 мл хлороформа, промыли водой (3производные мурамовой кислоты, патент № 218172925 мл). Органический слой высушили безводным Na2SO4 и упарили досуха. Изопропилиденовое производное очищали колоночной хроматографией (элюент: хлороформ --> хлороформ - этанол, 20:1).

Получение мурамовых кислот

К раствору сахарида со свободной С-3-ОН группой в сухом диоксане (20 мл/г) при перемешивании порциями добавили 4 экв. гидрида натрия. Реакционную смесь нагрели до 95oС, выдержали при этой температуре 1 ч и после охлаждения до 65oС прилили 1,5 экв. S-2-бромпропановой кислоты и выдержали при 65oС еще 3 ч. После охлаждения избыток гидрида натрия разложили этанолом, смесь концентрировали и вылили в холодную воду. Раствор подкислили 2 н. серной кислотой до рН 2-3 и экстрагировали мурамовую кислоту хлороформом. Экстракт высушили безводным Na2SO4 и упарили.

Конденсация N-оксисукцинимидным методом

К раствору кислоты в сухом диоксане или ТГФ (10-20 мл/г) при перемешивании добавили 1,1 экв. N-гидроксисукцинимида (HOSu) и 1,1 экв. N,N"-дициклогексилкарбодиимида (DCC). Через 3-5 ч отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, промыли его растворителем. К фильтрату добавили 1 экв. трифторацетата бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина и триэтиламин до рН 8. По окончании реакции продукт отделили фильтрованием.

Гидролиз изопропилиденовых производных

Изопропилиденовые производные растворили при нагревании на кипящей водяной бане в 80% уксусной кислоте (10 мл/г) и выдержали при этой температуре 20 мин (контроль ТСХ в системе хлороформ - этанол, 5:1). Раствор упарили досуха, остаток очистили колоночной хроматографией (элюент: хлороформ хлороформ --> этанол, 10:1).

Гидрогенолиз бензильных защит

Вещество растворили в этаноле, ТГФ или их смеси (50-100 мл/г) и подвергли гидрогенолизу над 10% Pd/C (1:5 к веществу) при комнатной температуре. Время реакции составляло 2-5 ч. По окончании реакции (контроль ТСХ в системе бутанол-1 - уксусная кислота - вода, 3:1:1) катализатор отфильтровали, промыли растворителем, фильтрат упарили. Остаток затерли в эфире.

Примеры синтеза производных мурамовой кислоты

Пример 1. 0-(Гексил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил)-D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамин (2).

Гексанол-1 (0,30 мл, 2,36 ммоль) гликозилировали 0,86 г (2,36 ммоль) хлорида 1 и после кристаллизации из эфира получили 0,45 г (45%) гексил-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-р-0-глюкопиранозида (2а). Аналитический образец перекристаллизовали из смеси эфир - гексан; т. пл. 125-127oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-17производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; хлороформ). "Н-ЯМР (300 МГц, С2НСl3): 0,88 т производные мурамовой кислоты, патент № 2181729, 1,28 м и 1,57 м ([СН2]n), 1,95с, 2,02с, 2,03с, 2,08с (12Н, NAc и 3 ОАс), 3,47 дт и 3,85 дт (2Н, С-1-ОСН3, Jгем 9,5 Гц), 3,70 ддд (1Н, Н-5, J5,6а 2,5 Гц, J5.6b 5 Гц), 3,83 ддд (1Н, Н-2, J2,3 10 Гц), 4,13 дд и 4,28 дд (2Н, Н-6a, Н-6b, J6а,6b 12 Гц), 4,69 д (1Н, Н-1, J1,2 8,5 Гц), 5,07 дд (1Н, Н-4, J4,5 9,5 Гц), 5,32 дд (1Н, Н-3, J3,4 9,5 Гц), 5,63 д (1Н, NH, J2,NH 8,5 Гц).

1,54 г (3,57 ммоль) ацетата 2а дезацетилировали и получили 1,0 г (92%) гексил-2-ацетамидо-2- дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D- глюкопиранозида (2б), которое изопропилиденировали и получили 0,61 г (54%) гексил-2-ацетамидо- 2-дезокси-4,6-0-изопропилиденпроизводные мурамовой кислоты, патент № 2181729- D-глюкопиранозида (2в); стеклообразный продукт, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-88производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; хлороформ).

Алкилированием 485 мг (1,41 ммоль) соединения 2в 5-2-бромпропановой кислотой синтезировали 0,57 г (97%) гексил-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-изопропилиден-3-0-(D-1-карбоксиэтил)-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (2г), которые конденсировали с трифторацетатом бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина. В гликопептидном 2д производном гидролизовали изопропилиденовую защиту и получили 0,48 г (55%) бензилового эфира 0-(гексил-2-ацетамидо-2- дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил) -D-лактоил-L-аланил-D- изоглутамина (2е), аморфный порошок, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-2производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; этанол). "Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 0,85 т производные мурамовой кислоты, патент № 2181729- 1,22 м производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,24 м и 1,43 м ([СН2]n), 1,75с (3Н, NAc), 1,77 м и 2,01 м (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-СН2-Glu), 2,35 т (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 4,10 ддд (1Н, CH-Glu), 4,18 дк (1Н, CH-Ala), 4,22 к производные мурамовой кислоты, патент № 2181729- 4,35 д (1Н, H-1, J1.2 8 Гц), 4,61 т (1Н, С-6-ОН), 5,04с (2Н, COOCH2Ph), 5,28а (1Н, С-4-ОН), 7,13с и 7,29с (2Н, CONH2-Glu), 7,36 м (5Н, Ph), 7,39 д, 7,80 д и 8,13 д (3Н, 3 NH).

В 250 мг (0,38 ммоль) соединения 2е удалили гидрогенолизом бензиловый эфир. Добавлением эфира высадили 170 мг (78%) аморфного гликопептида 2; [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+5производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,83; этанол).

Пример 2. 0-(Октил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил) -D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамин (3).

Октанол-1 (0,40 мл, 3,28 ммоль) гликозилировали 1,0 г (2,73 ммоль) хлорида 1 и после очистки колоночной хроматографией (элюент: бензол --> бензол - этанол, 50:1) получили 0,95 г (76%) октил-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил- 2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (3а). Аналитический образец перекристаллизовали из смеси эфир - гексан; т. пл. 103-105oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-31производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; хлороформ). "Н-ЯМР (300 МГц, С2НСl3): 0,88т производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,26 м и 1,56 м ([СН2]n), 1,95с, 2,02с, 2,03с, 2,08с (12Н, NAc и 3 ОАс), 3,47 дт и 3,86 дт (2Н, С-1-ОСН, Jгем 9,5 Гц), 3,84 ддд (1Н, Н-2, J2.3 10 Гц), 3,69 м (1-Н, H-5, J5,6a 2 Гц, J5.6b 4,5 Гц), 4,13 дд и 4,27 дд (2Н, Н-6а, H-6b, J6а, 6b 12 Гц), 4,69д (1Н, H-1, J1.2 8,5 Гц), 5,07 дд (1Н,H-4 J4.5 9,5 Гц), 5,32 дд (1Н, Н-3, J3.4 9,5 Гц), 5,49д (1Н, NH, J2,NH 8.5 Гц).

Дезацетилированием 2,5 г (5,45 ммоль) ацетата 3а получили 1,80 г (99%) октил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D- глюкопиранозида (3б), изопропилиденирование 1,65 г (4,95 ммоль) триола 3б дало 1,55 г (84%) аморфного октил-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-изопропилиден-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (3в); [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-71производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; хлороформ).

Алкилированием 2,2 г (5,9 ммоль) соединения 3в S-2-бромпропановой кислотой синтезировали 2,4 г (92%) октил-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-изопропилиден-3-0-(D-1-карбоксиэтил)-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-0-глюкопиранозида (3 г). Мурамовую кислоту 3г (2,0 г, 4,49 ммоль) конденсировали с трифторацетатом бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина. Выход гликопептидного производного 3д составил 2,0 г (61%). В 1,0 г (1,36 ммоль) соединения 3д гидролизовали изопропилиденовую защиту и получили 0,72 г (76%) бензилового эфира О-(октил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил) -D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамина (3е); [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-2производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; этанол). "Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 0,86т производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,24 м и 1,44 м производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,75с (3Н, NAc), 1,71 м и 1,94 м (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 2,20 т (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 3,69ддд (1Н, CH-Glu), 4,12дк (1Н, CH-Ala), 4,22к производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 4,25д (1Н, H-1, J1.2 8 Гц), 4,57т (1Н, С-6-ОН), 5,02с (2Н, COOCH2Ph), 5,25а (1Н, С-4-ОН), 7,09с и 7,33с (2Н, CONH2-Glu), 7,36 м (5Н, Ph), 7.39д, 7,80д и 8,09д (3Н, 3 NH).

В соединении 3е (350 мг, 0,51 ммоль) подвергли гидрогенолизу бензиловый эфир. Добавлением эфира высадили 290 мг (95%) аморфного гликопептида 3 [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+12производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,93, этанол).

Пример 3. 0-(Циклогексил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил)-D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамин (4).

Гликозилирование 1,42 мл (13,7 ммоль) циклогексанола 5,0 г (13,7 ммоль) хлорида 1 дало после перекристаллизации из эфира 3,97 г (68%) циклогексил-2-ацетамидо -3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D- глюкопиранозида (4а), т. пл. 178oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-18производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,77; хлороформ), "Н-ЯМР (200 МГц, С2НС13): 0,15 м, 1,61 м ([СН2] n), 1,83с, 1,91с, 1,92с, 1,97с (12Н, NAc и 3 ОАс), 3,55 (1Н, С-1-ОСН), 3,56 м (1Н, Н-2, J2.3 10,5 Гц), 3,59 м (1-Н, H-5, J5.6a 2,5 Гц, J5.6b 4,5 Гц), 3,99дд и 4,16дд (2Н, Н-6а, Н-6b, J6а,6b 12 Гц), 4,76д (1Н, Н-1, J1,2 8,5 Гц), 4,93дд (1Н, Н-4, J4.5 9,5 Гц), 5,29дд (1Н, Н-3, J3,4 9,5 Гц), 5,48д (1Н, NH, J2.NH 8,5 Гц).

Дезацетилированием 2,8 г (6,5 ммоль) перацетата 4а получили 1,9 г (96%) циклогексил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (4б). Изопропилиденирование 830 мг (2,74 ммоль) триола 4б дало 765 мг (81%) циклогексил-2-ацетамидо-2-дезокси- 4,6-0-изопропилиден-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D- глюкопиранозида (4в), стеклообразный продукт, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-69производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0, хлороформ).

Алкилирование 0,75 г (2,19 ммоль) соединения 4в S-2-бромпропановой кислотой привело к 0,85 г (94%) циклогексил-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-изопропилиден-3-0-(D-1-карбоксиэтил)-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D- глюкопиранозида (4г). 250 мг (0,53 ммоль) кислоты 4 г конденсировали с трифторацетатом бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина. В защищенном гликопептиде 4д удалили изопропилиденовую защиту и получили 635 мг (48%) бензилового эфира 0-(циклогексил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил)-D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамина (4е); аморфный белый порошок, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+6производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; этанол). "Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 1,23 м, 1,41 м и 1,60 м производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,74с (3Н, NAc), 1,77 м и 2,01 м (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-СН2-Glu), 2,35 т (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 4,09ддд (1Н, CH-Glu), 4,17дк (1Н, CH-Ala), 4,23к производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 4,37д (1Н, H-1, J1.2 8 Гц), 4,56т (1Н, С-6-ОН), 5,07с производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 5,24д (1Н, С-4-ОH), 7,12с и 7,32с (2Н, CONH2-Glu), 7,35 м (5Н, Ph), 7,41д, 7,77д и 8,12д (3Н, 3 NH).

Каталитический гидрогенолиз 325 мг (0,49 ммоль) бензилового эфира 4е привел к 265 мг (92%) гликопептида 4; аморфный порошок, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+6производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,67; этанол).

Пример 4. 0-[(Адамантил-1-метил)-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил]-D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамин (5)

230 мг (1,37 ммоль) адамантил-1-метанола гликозилировали 500 мг (1,37 ммоль) хлорида 1 и после очистки колоночной хроматографией (элюент: бензол --> бензол - этанол, 25:1) получили 270 мг (41%) (адамантил-1-метил)-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезоксипроизводные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (5а); т. пл. 136-138oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-30производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,77; хлороформ). "Н-ЯМР (200 МГц, С2НСl3): 1,43 м, 1,61 м (СН2 и СН), 1,89с, 1,96с, 1,97с, 2,03с (12Н, NAc и 3 ОАс), 2,90д и 3,45д (2Н, C-1-OCH2, Jгем 10), 3,86ддд (1Н, Н-2, J2.3 10,5 Гц), 3.60ддд (1-Н, Н-5, J5.6а 2,5 Гц, J5.6b 4,5 Гц), 4,06дд и 4,21дд (2Н, Н-6а, H-6b, J6a,6b 12 Гц), 4,48д (1Н, Н-1, J1.2 8,5 Гц), 5,06дд (1Н, Н-4, J4,5 9,5 Гц), 5,18дд (1Н, Н-3, J3,4 9,5 Гц), 5,58д (1Н, NH, J2,NH 8,5 Гц).

Дезацетилирование 1,0 г (2,02 ммоль) ацетата 5а дало 0,71 г (95%) (адамантил-1-метил)-2-ацетамидо -2-дезокси-р-0- глюкопиранозида (5б). Изопропилиденировали 0,61 г (1,66 ммоль) вещества 5б и выделили 416 мг (62%) (адамантил-1-метил)-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-изопропилиден -производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (5в), т. пл. 172-174oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-56производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; хлороформ).

Алкилированием 415 мг (1,02 ммоль) соединения 5в 5-2-бромпропионовой кислотой синтезировали 470 мг (96%) (адамантил-1-метил)-2-ацетамидо-2-дезокси- 4,6-0-изопропилиден-3-0-(D-1-карбоксиэтил)-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729- D-глюкопиранозида (5 г). 470 мг (0,98 ммоль) кислоты 5г конденсировали трифторацетатом бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина и выделили 510 мг (68%) бензилового эфира 0-[(адамантил-1-метил)-2-ацетамидо- 2-дезокси-4,6-0- изопропилиден-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D- глюкопиранозид-3-ил] -D-лактоил-L-аланил- D-изоглутамина (5д). "Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 1,20д и 1,25д производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,32с и 1,46с (6Н, Ме2С), 1,43 м и 1,61 м (СН2 и СН), 1,78с (3Н, NAc), 1,90м и 2,00м (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 2,35т (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-СН2-Glu), 2,91д и 3.30д (2Н, C-1-ОСН2, Jгем 10), 4,00ддд (1Н, CH-Glu), 4,19дк (1Н, CH-Ala), 4,24к производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 4,32д (1Н, Н-1, J1.2 8), 5,08с производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 7,13с и 7,32с (2Н, CONH2), 7,36 м (5Н, Ph), 7,29д, 7,91 д и 8,15д (3Н, 3 NH). В производном 5д (280 мг, 0,36 ммоль) кислотным гидролизом удалили изопропилиденовую защиту и получили 250 мг (95%) бензилового эфира 0-[(адамантил-1-метил)-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D -глюкопиранозид-3-ил] -D-лактоил- L-аланил-D-изоглутамин (5е); т. пл. 133-135oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+4производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 1,0; этанол).

Каталитический гидрогенолиз 250 мг (0,34 ммоль) бензилового эфира 5е привел к 190 мг (85%) гликопептида 5, аморфный порошок.

Пример 5. 0-(Фенил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил)-D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамин (6).

Реакционную смесь, состоящую из 1,0 г хлорида 7, 0,52 г (5,48 ммоль) фенола, 0,52 г (2,29 ммоль) тетраэтилбензиламмонийхлорида, 3,5 мл (4,38 ммоль) 1,25 н. раствора NaOH и 10 мл хлороформа, интенсивно перемешивали при комнатной температуре до исчезновения гликозил-донора (контроль ТСХ в системе хлороформ - этанол, 10:1). Смесь разбавили 10 мл воды и 10 мл хлороформа. Органический слой отделили, промыли 1 н. NaOH (2производные мурамовой кислоты, патент № 21817295 мл) и водой (10 мл). Хлороформный экстракт осушили безводным Na2SO4 и упарили. Остаток перекристаллизовали из изопропилового спирта и получили 0,76 г (66%) фенил-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D -глюкопиранозида (6а), т. пл. 205-206oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б-13производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,95, хлороформ). "Н-ЯМР (300 МГц, С2НСl3): 1,95с, 2,05с, 2,06с, 2,08с (12Н, NAc и 3 ОАс), 3,88ддд (1-Н, Н-5, J5.6a,2,5 Гц, J5.6b 5 Гц), 4,14ддд (1Н, Н-2, J2.3 10,5 Гц), 4,18дд и 4,29дд (2Н, Н-6а, Н-6b, J6a,6b 12 Гц), 5,15д (1Н, Н-4, J4,5 9,5 Гц), 5,28дд (1Н, Н-1, J1.2 8,5 Гц), 5,42дд (1Н, Н-3, J3.4 9,5 Гц), 5,58д (1Н, NH, J2.NH 9 Гц), 7,01 м и 7,28 м (5Н, СНаром).

0,76 г (1,8 ммоль) ацетата 6а растворили в кипящем сухом метаноле, охладили до -40oС и добавили 0,5 мл 0,1 н. раствора метилата натрия в метаноле. Выпавший при стоянии осадок отфильтровали, промыли холодным метанолом. Выход фенил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (6б) - 0,47 г (87%). Изопропилиденированием 0,47 г (1,57 ммоль) вещества 6б получили 0,47 г (89%) фенил-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-изопропилиден-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-/ D-глюкопиранозида (6в); т. пл. 153-154oС, [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+55производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,8; хлороформ - метанол, 3:1).

0,45 г (1,36 ммоль) соединения 6в алкилировали S-2-бромпропионовой кислоты и добавлением эфира выделили 0,42 г (76%) фенил-2-ацетамидо-2-дезокси-4,6-0-

изопропилиден-3-0-(D-1-карбоксиэтил)-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозида (6 г). "Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6). 1,24д производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 1,33с и 1,48с (6Н, Ме2С), 1,80с (3Н, NAc), 4,19к производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 5,25д (1H, Н-1, J1.2 6 Гц), 6,97 м и 7,29 м (5Н, СНаром.), 7,84д (1Н, NH, J2.NH 6 Гц), 12,48ус (1Н, СООН). Конденсацией 270 мг (0,66 ммоль) кислоты 6г с трифторацетатом бензилового эфира L-аланил-D-изоглутамина синтезировали 270 мг (59%) гликопептида 6д. Кислотный гидролиз изопропилиденовой защиты в производном 6д (190 мг, 0,27 ммоль) дал 179 мг (100%) бензилового эфира 0-(фенил-2-ацетамидо-2-дезокси-производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-D-глюкопиранозид-3-ил)-D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамина (6е), т. пл. 212-213oС (с разл.), [производные мурамовой кислоты, патент № 2181729]54б+25производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 (с 0,67; этанол). "Н-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 1,25д и 1,27д (6H,2CH3CH,JMe,CH7Гц), 1,78с (3Н, NAc), 1,80 м и 2,02 м (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 2,36т (2Н, производные мурамовой кислоты, патент № 2181729-CH2-Glu), 3,90ддд (1Н, CH-Glu), 4,18дк (1Н, CH-Ala), 4,26к производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 4,69ус (1Н, С-6-ОН), 4,95д (1Н, Н-1, J1.2 8,5 Гц), 5,08с производные мурамовой кислоты, патент № 2181729 5,40ус (1Н, С-4-ОН), 6,98м (3Н) и 7,30м (2Н) (5Н, Наром), 7,13с и 7,32с (2Н, CONH2), 7,36м (5Н, Ph), 7,47д, 7,91д и 8,14д (3Н, 3 NH).

Бензиловый эфир 6е (180 мг, 0,27 ммоль) подвергли каталитическому гидрогенолизу. Выход гликопептида 6 - 130 мг (84%); аморфный порошок.

Примеры исследования биологических свойств производных мурамовой кислоты.

Исследована биологическая активность производных мурамовой кислоты в модельных тест-системах in vitro и in vivo. Продемонстировано, что вышеописанные соединения в большинстве тест-систем превышают по активности немодифицированный МДП и его известные гликозидные аналоги. Более того, в модельных тест-системах in vivo оригинальные производные МДП проявляли терапевтическое действие по стимуляции противоопухолевого иммунного ответа и усилению неспецифической резистетности к инфекционным заболеваниям в гораздо более низких концентрациях, чем немодицированный МДП. Последняя закономерность наблюдалась и при внутрибрюшинном, и при внутривенном, и при пероральном введении препаратов, что говорит о высокой биодоступности оригинальных производных мурамовой кислоты при вышеописанных путях введения в организм.

Ниже приведены два примера сравнительного изучения иммуномодулирующей активности производных мурамовой кислоты в модельных тест-ситемах in vitro.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Производные мурамовой кислоты общей формулы:

производные мурамовой кислоты, патент № 2181729

где Х - С120-алкил, за исключением Х - бутил, гептил или гексадецил, или С39-циклоалкил, незамещенный или замещенный С13-алкилом, или адамантил, незамещенный или замещенный С13-алкилом, или С612-арил, незамещенный или замещенный одним или тремя С13-алкилами.

Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07K9/00 Пептиды, содержащие до 20 аминокислот с сахаридными радикалами и полностью определенной последовательностью; их производные

Патенты РФ в классе C07K9/00:
фармацевтическое средство, содержащее эпитопные пептиды hig2 и urlc10, для лечения рака, способы и средства для индукции антигенпрезентирующей клетки и цитотоксического т-лимфоцита (цтл), антигенпрезентирующая клетка и цтл, полученные таким способом, способ и средство индукции иммунного противоопухолевого ответа -  патент 2529373 (27.09.2014)
модифицированный пептид и его использование для тестирования онкологических заболеваний цнс и эффективности терапии -  патент 2491291 (27.08.2013)
гликозилированные гликопептидные антибиотические производные -  патент 2481354 (10.05.2013)
способ получения пептида -  патент 2478105 (27.03.2013)
пептиды rumc, обладающие антимикробной активностью -  патент 2464274 (20.10.2012)
состав полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура -  патент 2453557 (20.06.2012)
пептид с антипролиферативной активностью и фармацевтическая композиция для лечения пролиферативных заболеваний -  патент 2446174 (27.03.2012)
мономерные производные гликопептидного антибиотика -  патент 2424248 (20.07.2011)
способ очистки ванкомицина -  патент 2400489 (27.09.2010)
композиции далбаванцина для лечения бактериальных инфекций -  патент 2352353 (20.04.2009)

Класс A61K38/14 пептиды, содержащие сахаридные радикалы; их производные

Класс A61P37/02 иммуномодуляторы

Патенты РФ в классе A61P37/02:
способ лечения больных с онкологическими заболеваниями и/или иммунодепрессиями -  патент 2528877 (20.09.2014)
средство для лечения аутоиммунных заболеваний -  патент 2528337 (10.09.2014)
способ получения комплексного иммунометаболического препарата с антиинфекционной активностью -  патент 2527329 (27.08.2014)
способ получения комплексного антибактериального иммуномодулирующего препарата -  патент 2526184 (20.08.2014)
применение бензофенонового производного или его соли и ингибитора tnf- в комбинации, и фармацевтическая композиция, содержащая данное производное или его соль и ингибитор -  патент 2522272 (10.07.2014)
способ получения персонального препарата для лечения диабета, персональный препарат, полученный этим способом, способ лечения диабета этим препаратом -  патент 2522250 (10.07.2014)
фармацевтическая композиция, обладающая противотромботическим, тромболитическим, иммуномодулирующим, противовоспалительным действиями, нормализующая липидный и углеводный обмен -  патент 2519741 (20.06.2014)
производное 5-оксипиримидина, обладающее противоопухолевой активностью -  патент 2518889 (10.06.2014)
способ моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок на микобактерии m.bovis -  патент 2517218 (27.05.2014)
средство, обладающее адаптогенной и иммуномодулирующей активностью -  патент 2516886 (20.05.2014)


Наверх