способ диагностики субклинического мастита у коров

Формула изобретения

Способ диагностики субклинического мастита у коров, включающий исследование секрета молочной железы путем внесения реагента в пробу свежевыдоенного молока, отличающийся тем, что в качестве реагента используют водный раствор жидкого моющего средства "Прогресс" в разведении 1:19.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способам диагностики субклинического мастита у лактирующих коров.

Одним из признаков субклинического мастита является повышенное содержание лейкоцитов в пробах свежевыдоенного молока: если у здоровых коров их количество находится в пределах от 100 до 500 тыс./мл, то при субклиническом мастите составляет 1-6 млн./мл.

Для массовых диагностических исследований на субклинический мастит непосредственно в производственных условиях применяют пробы, основанные на обнаружении повышенного содержания лейкоцитов в молоке косвенным путем - по образованию желеподобного сгустка после внесения реагента. В качестве реагентов используют поверхностно-активные вещества (ПАВ): сульфанол, триполифосфат. Сущность реакции состоит в следующем: под воздействием ПАВ происходит разрушение мембран лейкоцитов и высвобождение ДНК, последняя коагулирует, увеличивая вязкость и консистенцию жидкости. Подбором концентрации ПАВ добиваются того, чтобы заметное образование желе происходило при содержании лейкоцитов свыше 500 тыс./мл молока (W. Philpot. Economics of Mastitis Control. // The veterinary Clinics of North America. Vol. 6. N 2. 1984. P. 233-255).

Наиболее близким к заявляемому является способ диагностики мастита у коров с использованием мастидина, предложенный в 1968 г. И.И. Архангельским, Н.К. Оксамитным (Ж. Ветеринария, N 5, 1968, с. 21-25).

Мастидин выпускается отечественной фармацевтической промышленностью и представляет собой жидкость, содержащую сульфанол (10%) и индикатор pH - бромкрезоловый пурпурный (0,05%).

Перед использованием содержимое флакона с мастидином разбавляют в соотношении 1:4 дистиллированной водой. Из каждой четверти вымени исследуемой коровы выдаивают 1-2 мл молока в индивидуальные лунки молочно-контрольной пластины, после чего вносят примерно равный объем реагента. Содержимое лунок поочередно перемешивают в течение 10-15 с, наблюдая за изменением его вязкости и консистенции. На наличие субклинического мастита указывает образование плотного желеобразного сгустка или тягучей массы. Одновременно изменяется цвет смеси молока с реагентом, однако это лишь ориентирующий признак.

Недостатками данного способа являются высокая стоимость мастидина, непродолжительный срок его годности (4 мес), дефицит компонентов (сульфанол, бромкрезолпурпур).

Цель изобретения - изыскать дешевый, доступный и эффективный реагент отечественного производства.

Указанная цель достигается тем, что в пробу свежевыдоенного молока вносят в качестве реагента жидкое моющее средство "Прогресс" марки 20 в разведении 1:19.

Жидкость "Прогресс" выпускает Новочеркасский завод синтетических продуктов для применения в бытовых целях. Она изготовляется согласно ТУ 38-10719-92 и имеет следующий состав (г/1000 мл):

алкилсульфат натрия - 240

сульфат натрия - 35

сода каустическая - 5

неомыляемые углеводороды - 3,15

изопириловый спирт - 35

бикарбонат натрия - 1,2

сода кальцинированная - 0,29

вода - остальное

Для приготовления реагента отмеривают 50 мл жидкости "Прогресс" М- 20 и вносят в колбу, содержащую 950 мл водопроводной (кипяченой или сырой) воды. Полученный рабочий раствор разливают в стеклянные флаконы емкостью 100-250 мл или в пластиковые бутылки и хранят при плюсовых температурах без ограничения срока.

Способ постановки реакции следующий: в лунки молочно-контрольной пластины выдаивают 1-2 мл молока из каждой четверти вымени, после чего вносят примерно равный объем раствора жидкости "Прогресс" в разведении 1:19. Содержимое лунок поочередно перемешивают в течение 15-20 с, наблюдая за изменением его вязкости и консистенции На наличие субклинического мастита указывает образование плотного желеобразного сгустка или тягучей массы.

Пример 1. Провели поиск оптимальной степени разведения жидкости "Прогресс" для постановки тест-реакции на субклинический мастит. Основываясь на результатах прямого подсчета лейкоцитов камерным методом, отобрали 5 проб молока из пораженных субклиническим маститом и 5 - из здоровых четвертей вымени. В лунки молочно-контрольной пластины ПМК-2 вносили мерной пипеткой по 2,0 мл жидкости "Прогресс" в том или ином разведении (использовали разведения 1:9, 1:14, 1:19, 1:24). Результаты оценивали по плотности сгустка и скорости образования желе.

Наиболее полное совпадение показаний тест-реакций с прямым подсчетом лейкоцитов получили при использовании жидкости "Прогресс" в разведении 1:19 (таблица 1).

Пример 2. Сопоставили показания заявляемого способа и результатов прямого подсчета лейкоцитов. Для этого на молочной ферме предлагаемым способом исследовали на субклинический мастит группу коров. Основываясь на полученных данных, отобрали 15 проб молока, в том числе 6 - с положительной, 4 - сомнительной и 5 - отрицательной тест-реакцией. Пробы доставили в лабораторию, где провели прямой подсчет лейкоцитов в каждой пробе по методу Н.М. Хилькевич (таблица 2).

В пробах молока с отрицательной тест-реакцией лейкоцитов содержалось 0,43 0,33 млн/мл, что соответствует норме. В пробах с сомнительной тест-реакцией их было в 2 раза больше (0,9 0,064 млн/мл), а в пробах с положительной тест-реакцией лейкоцитов насчитывалось 1,83 0,91 млн/мл, что характерно для субклинического мастита.

Пример 3. На молочной ферме в наиболее неблагополучной по маститу группе отобрали 14 проб молока и провели исследование на субклинический мастит параллельно двумя способами: предлагаемым и базовым, с применением в качестве реагента мастидина. Во все четыре лунки молочно-контрольной пластины ПМК-2 мерной пипеткой помещали по 2,0 мл молока из одного флакона. В две лунки прибавляли точно отмеренное количество (2 мл) жидкости "Прогресс" в разведении 1:19, в две остальные - мастидин. После перемешивания молока с реагентом оценивали показания тест-реакции по двум критериям: плотности сгустка и скорости образования желе. Сравнительные данные двух способов приведены в таблице 3.

При использовании предлагаемого способа 9 проб молока дали четкую положительную и 5 - отрицательную тест-реакцию. На мастидин реагировали положительно 7, сомнительно - 1 и отрицательно - 5 проб.

Одним из показателей чувствительности диагностикума является скорость тест-реакции. Сравнительная оценка двух диагностикумов по данному показателю (таблица 4) показала, что в случае использования предлагаемого способа образование желе завершалось спустя 13-27 с (в среднем 18,5 1,8 с), базового способа 30-80 с (в среднем 60,37 8,73 с).

Таким образом, предлагаемым диагностикумом по сравнению с мастидином выявлено четвертей вымени с положительной тест-реакцией на 22,2% больше, образование желе завершалось в 3,2 раза быстрее.

Результаты опытов позволяют констатировать следующее. Жидкое моющее средство "Прогресс" М-20 (производства Новочеркасского завода синтетических продуктов) в разведении 1:19 является высокочувствительным индикатором субклинического мастита лактирующих коров и может применяться для ежемесячного обследования дойных стад взамен стандартных диагностикумов промышленного изготовления. Заявляемый способ выгодно отличается низкой стоимостью, большей доступностью и простотой изготовления реагента, практически неограниченным сроком хранения товарного продукта.