Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

способ получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей

Классы МПК:A23J1/18 из дрожжей 
C12P13/04 альфа- или бета-аминокислоты
C12N1/06 распад микроорганизмов
C12N1/16 дрожжи; питательные среды для них
Автор(ы):, , , , , , ,
Патентообладатель(и):Акционерное общество "Биотехнология"
Приоритеты:
подача заявки:
1994-04-01
публикация патента:

Полученный экстракт может применяться в микробиологии, медицине, пищевой промышленности (микробиологические питательные среды, продукты питания). Суспензию дрожжей подвергают автолизу в присутствии олеиновой кислоты в течение 4-12 ч при pH 6,0-7,5, затем прогревают и отделяют осадок. Экстракт концентрируют выпариванием до содержания ACB 8-20%, концентрат осветляют нагреванием при 90-100oC и при необходимости высушивают.

В процессе автолиза после достижения содержания аминного азота 1,5-3,5 мг/мл в автолизат может быть внесен протеолитический фермент из расчета 4-8 ед. активности на 1 г ACB.

После осветления экстракт дополнительно может быть очищен ультра- или микрофильтрацией.

Для получения осветленного экстракта могут быть использованы любые разрешенные к применению дрожжи пищевого и кормового достоинства.

В качестве протеолитических ферментов могут быть использованы ферменты, не дающие при гидролизе продуктов с горьким вкус ом.

Для очистки используют мембраны с диаметром пор 0,1-0,4 мкм или задерживающие вещества с М.м выше 5-10 кДа. 2 з.п. ф-лы, 3 табл.

Рисунки к патенту РФ 2084171

Рисунок 1

Изобретение относится к области микробиологии, медицины и пищевой промышленности, может быть использовано при приготовлении микробиологических питательных сред, а также продуктов питания.

Известен способ производства дрожжевого экстракта путем механического измельчения и автолиза суспензии клеток пекарских дрожжей. Для усиления автолиза к суспензии добавляют протеолитические ферменты. До или после механического измельчения к суспензии добавляют сульфит, от гидролизованной суспензии отделяют нерастворимые примеси, к надосадочной жидкости добавляют соединения кальция и жидкость осветляют (1).

Ближайшим аналогом является способ изготовления дрожжевого экстракта, заключающийся в том, что клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae либо Candida ufilis механически дезинтегрируют, доводят pH суспензии до 4,4-6,8 и добавляют протеолитический фермент. Автолиз ведут в течение 15-22 час при 55oC. После окончания процесса фермент инактивируют нагреванием массы до 90-95oC в течение 1 часа. Осадок отделяют центрифугированием, а супернатант осветляют хлоридом кальция и концентрируют упариванием до содержания сухого вещества 70% (2)

Однако, известный способ не гарантирует получение целевого продукта, свободного от значительной примеси липидов, компонентов нуклеиновых кислот и полисахаридов; с содержанием микрофлоры, не превышающей 104 кл/г и 95-100% степенью прозрачности 1-2%-ных растворов продуктов, что является обязательными показателями при использовании экстракта для приготовления жидких питательных сред. Кроме того, процесс автолиза (совместно с протеолизом) очень длителен (15-22 час), что может привести к контаминации повторной микрофлорой.

Технический результат от осуществления предлагаемого способа выражается в том, что получают экстракт с высоким содержанием свободных L-аминокислот и низкомолекулярных пептидов, не содержащий нерастворимых примесей и обладающий 96-100%-ой прозрачностью в 1-10%-ных растворах (водных).

Поставленная задача достигается тем, что суспензию дрожжей с содержанием массы сухих клеток (МСК) 6-18% подвергают автолизу в присутствии олеиновой кислоты (3). Олеиновую кислоту добавляют в суспензию дрожжей с pH 3,5-5,0 (установленную с помощью ортофосфорной кислоты) в количестве 600-1200 нМ/мл. Затем доводят pH суспензии до 6,0-7,5 с помощью NaOH и ведут процесс автолиза в течение 4-1 час при 45-55oC и постоянном перемешивании.

Автолизированную суспензию подвергают плазмолизу, отделяют осадок и доводят концентрирование экстракта выпариванием до содержания сухих веществ 8-20% полученный концентрат экстракта осветляют прогреванием при 90-100oC и при необходимости высушивают.

В процессе автолиза после достижения содержания аминного азота 1,5-3,5 мг/мл в автолизат может быть внесен протеолитический фермент из расчета 4-8 ед. активности на 1 г МСК.

После осветления экстракт может быть дополнительно очищен фильтрацией на мембранах, типа УПМ-5, МФЦ-п, задерживающих вещества с М.м. выше 5-10 кДа, или микрофильтрацией на стерилизующих мембранах с диаметром пор 0,1-0,4 мкм.

Для получения осветленного экстракта могут быть использованы любые разрешенные к применению дрожжи пищевого и кормового достоинства.

Автолиз дрожжевой суспензии в присутствии олеиновой кислоты проходит таким образом, что в экстракте при значительном количестве общего (не менее 10% ) и аминного (не менее 2,4%) азота содержится не более 18% золы и не более 3,0% углеводов. Проведение процесса в области нейтральных pH дает возможность получать продукт, имеющий pH 5,3-6,8 в 2%-ных водных растворах.

В качестве ферментов, обладающих протеолитической активностью, могут быть использованы ферменты, не образующие при гидролизе белковых аминокислот и низкомолекулярных пептидов, обладающих горьким вкусом, например, Протосубтилин, пепсин, трипсин, лизоцим, папаин и др.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 25 л суспензии хлебопекарных дрожжей с содержанием МСК 10% подвергают индуцированному автолизу в присутствии олеиновой кислоты. pH дрожжевой суспензии доводят до pH 3,5 ортофосфорной кислотой, вносят 1000 нМ/мл олеиновой кислоты, нагревают до 52oC и изменяют pH до 6,8-7,2 с помощью NaOH; процесс автолиза ведут при перемешивании. (В следующих примерах автолиз ведут аналогично).

Через 2 сача после достижения в автолизате аминного азота 1,5 мг/мл вносят 166,6 г Протосубтилина Г10х с протеолитической активностью 120 ед/г, предварительно растворенного в воде, из расчета 8 ед/г ACB. Полученную смесь выдерживают в течение 3-х часов, а затем прогревают для инактивации фермента.

После прогревания суспензию охлаждают до 20oC и сепарируют. Полученный экстракт в количестве 21 л с содержанием ACB 4,9% концентрируют вакуум-выпариванием при 60oC до содержания ACB 20% Концентрат прогревают 60 мин. при температуре 90oC. Выпавший осадок низкорастворимых балластных веществ отделяют центрифугированием.

Осветленный концентрат в количестве 3,2 л и содержанием ACB 19,2% для дальнейшей очистки подвергают микрофильтрации на мембранах МФЦ-п с диаметром пор 0,1-0,15 мкм. 3,1 л микрофильтрата с содержанием ACB 15,0% высушивают распылением. Механические потери при высушивании составляют 20%

Получают 404,3 г сухого осветленного экстракта автолизированных дрожжей. Содержание в готовом продукте массовой доли аминного азота в пересчете на ACB 5,52% (4), массовой доля сырого протеина в пересчете на ACB 62,1% Прозрачность 1%-ного раствора препарата 100%

Пример 2. Автолизу в присутствии олеиновой кислоты подвергают 150 л суспензии кормовых дрожжей, выращенных на н-парафинах (паприна), с содержанием МСК 10,7% Процесс ведут в течение 7 час при pH 7,0 и температуре 52oC до достижения содержания аминного азота в автолизате 5,04 мг/мл (4). После плазмолиза при 95oC в течение 45 мин и отделения дрожжевого шлама, экстракт подвергают вакуум-выпариванию до содержания сухих веществ 14,3% Полученный концентрат экстракта прогревают, отделяют осадок, подвергают микрофильтрации на мембранах типа МФЦ-п с диаметром пор 0,4 мкм и высушивают распылением.

Получают 1,25 кг продукта с влажностью 6,8% с содержанием (% от ACB) сырого протеина 73,0, аминного азота 8,2(4), редуцирующих веществ 1,01. Прозрачность 1%-ного раствора препарата 97%

Пример 3. Суспензию кормовых дрожжей, выращенных на этаноле (эприна) с содержанием МСК 15% в количестве 21 л и подвергают индуцированному автолизу в присутствии олеиновой кислоты. Через 6 часов автолиза при достижении содержания в автолизированной суспензии аминного азота 2,0 мг/мл, pH 7,5 вносят 120 г Протосубтилина Г3х с протеолитической активностью 70 ед./г, предварительно растворенного в воде, из расчета 4 ед./г ACB.

Длительность процесса протеолиза 2 часа при температуре 55oC. По окончании протеолиза суспензию прогревают при 90oC для инактивации фермента, затем охлаждают и центрифугируют.

Полученный экстракт с содержанием ACB 5,5% подвергают вакуум-концентрированию при 40oC до содержания ACB 15% Концентрат в количестве 4,5 л прогревают 60 мин. при 100oC и выпавший осадок отделяют.

Осветленный концентрат с содержанием ACB 14,5% в количестве 4,45 л высушивают лиофильно.

Получено 510 г готового продукта с содержанием массовой дол аминного азота 7,75% (4), массовой доли сырого протеина в пересчете на ACB 68,3% Прозрачность 1%-ного раствора продукта 96%

Пример 4. 1 л суспензии "остаточных" пивных дрожжей с содержанием МСК 8% подвергают индуцированному автолизу в присутствии олеиновой кислоты при pH 7,0 и температуре 52oC в течение 6 час. Для отделения дрожжевого шлама автолизированную суспензию подвергают плазмолизу, охлаждают и центрифугируют. Экстракт концентрируют на роторном испарителе до достижения в концентрате ACB 10% по рефрактометру и прогревают 20 мин. при 100oC. Выпавший осадок отделяют центрифугированием и осветленный концентрат высушивают лиофильно.

Получают 22 г осветленного экстракта с содержанием аминного азота 5,2% редуцирующих сахаров 1,1% золы 15% при влажности 6,5% Прозрачность 1%-ного раствора препарата 96%

Использование способа позволяет интенсифицировать процесс за счет сокращения времени автолиза и протеолиза дрожжей, снизить содержание золы за счет исключения из процесса стадии внесения дополнительных химических реагентов для осветления экстракта, расширить сферу применения экстракта, используя его для приготовления ростовых и диагностических микробиологических питательных сред, в том числе для особо требовательных микроорганизмов (Табл. 1-3).

Результаты испытаний показывают, что осветленный экстракт автолизированных дрожжей, добавленный в качестве стимулятора к жидким питательным средам ускоряет рост тест-культур в 1,3-3,7 раз.

Использование осветленного экстракта в качестве основы жидких и твердых питательных сред позволяет повысить ростовые свойства тривиальных жидких сред в 6-6,5 раз, специальных на 10-14% твердых в 1,3-1,8 раз.

Эффект действия осветленного экстракта зависит от вида микроорганизма и варианта получения экстракта.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей, включающий автолиз дрожжевой суспензии, прогревание, отделение экстракта, его концентрирование выпариванием и осветление, отличающийся тем, что суспензию дрожжей с содержанием массы сухих клеток 6 18% подвергают автолизу в присутствии олеиновой кислоты в течение 4 12 ч при pH 6,0 7,5, концентрирование проводят перед стадией осветления до содержания в экстракте сухих веществ 8 20% полученный концентрат экстракта осветляют прогреванием при 90 100oС и при необходимости высушивают.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе автолиза после достижения содержания аминного азота 1,5 3,5 мг/мл в автолизат вносят протеолитический фермент из расчета 4 8 ед. активности на 1 г АСВ.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что после осветления экстракт дополнительно очищают фильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,1 0,4 мкм.

Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A23J1/18 из дрожжей 

Патенты РФ в классе A23J1/18:
дрожжевой экстракт, способ его получения и его применение -  патент 2455833 (20.07.2012)
способ получения пищевого витаминного концентрата -  патент 2446207 (27.03.2012)
способ получения белково-углеводной биологически активной кормовой добавки -  патент 2391857 (20.06.2010)
средство для повышения адаптируемости организма к экстремальным условиям -  патент 2390271 (27.05.2010)
способ получения белкового гидролизата -  патент 2375441 (10.12.2009)
способ получения автолизата дрожжей -  патент 2375440 (10.12.2009)
способ получения пищевого белка, обогащенного биологически активными компонентами -  патент 2355186 (20.05.2009)
способ получения биологически активного концентрата из пищевых дрожжей -  патент 2322812 (27.04.2008)
способ получения автолизата дрожжей -  патент 2306714 (27.09.2007)
биологически активное вещество (варианты) и биологически активная добавка к пище (варианты) -  патент 2297162 (20.04.2007)

Класс C12P13/04 альфа- или бета-аминокислоты

Патенты РФ в классе C12P13/04:
способ получения l-аминокислоты -  патент 2515044 (10.05.2014)
способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности -  патент 2508404 (27.02.2014)
бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспарагиновой кислоты или метаболитов, производных l-аспарагиновой кислоты, и способ получения l-аспарагиновой кислоты или метаблитов, производных l-аспарагиновой кислоты -  патент 2472853 (20.01.2013)
способ получения l-аргинина и l-цитруллина с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена pepa -  патент 2471870 (10.01.2013)
мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот -  патент 2471868 (10.01.2013)
способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина -  патент 2468083 (27.11.2012)
способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae -  патент 2460793 (10.09.2012)
способ получения l-цистеина, l-цистина, s-сульфоцистеина или тиазолидинового производного l-цистеина, или их смеси с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae -  патент 2458982 (20.08.2012)
способ получения l-цистеина с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae -  патент 2458981 (20.08.2012)
бактерия - продуцент продукта реакции, катализируемой белком, обладающим активностью 2-оксоглутарат-зависимого фермента, и способ продукции указанного продукта -  патент 2444568 (10.03.2012)

Класс C12N1/06 распад микроорганизмов

Класс C12N1/16 дрожжи; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/16:
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5031 для производства хересных виноматериалов -  патент 2529838 (27.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5030 для производства белых столовых вин -  патент 2529834 (27.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5032 для производства красных столовых виноматериалов -  патент 2529833 (27.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5029 для производства десертных вин -  патент 2529832 (27.09.2014)
способ культивирования дрожжей phaffia rhodozyma для получения кормовой добавки, содержащей астаксантин -  патент 2529715 (27.09.2014)
модифицированная дрожжевая двугибридная система для эффективного исследования взаимодействия между белками и их доменами. -  патент 2529356 (27.09.2014)
способ культивирования хлебопекарных дрожжей -  патент 2528872 (20.09.2014)
способ получения препарата для профилактики инфекций пищеварительного тракта у сельскохозяйственной птицы и препарат, полученный способом -  патент 2528747 (20.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae для производства шампанского -  патент 2526493 (20.08.2014)
применение штамма дрожжей komagataella pastoris в качестве реципиента для конструирования продуцентов целевого белка -  патент 2522479 (20.07.2014)

Наверх