Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы, составы для них, способы получения подобных составов: .использующие люциферазу – C12Q 1/66

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к реагенту для определения аденозин-5'-трифосфата. Данный реагент содержит мутантную люциферазу светляков Luciola mingrelica (SEQ ID No:2), выделенную из рекомбинантных клеток E.coli, трансформированных плазмидой pETL7, люциферин, сульфат магния, трис-(оксиметил)-аминометан, уксусную кислоту, этиленаминотетраацетат натрия, дитиотреитол, бычий сывороточный альбумин, сахарозу и воду. Предложенное изобретение позволяет повысить чувствительность определения АТФ, а также снизить расход фермента. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использован в химии, биохимии, медицине, микробиологии, экологии и сельском хозяйстве для анализа веществ биолюминесцентным методом. Биомодуль содержит иммобилизованные в гель люциферазу, НАДН:ФМН-оксидоредуктазу, миристиновый альдегид, НАДН, стабилизатор ферментов - дитиотрейтол в концентрации 1·10^-4 M, раствор ФМН и подложку. Способ приготовления биомодуля включает приготовление 3-5% геля кипячением суспензии крахмала в фосфатном буфере или нагреванием суспензии желатина в фосфатном буфере до 60-80°С, охлаждение геля до 24-30°С, смешивание буферного раствора биферментной системы светящихся бактерий НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза, растворов мириетинового альдегида, восстановленного никотинамидадениндинуклеотида, стабилизатора ферментов - дитиотрейтола в концентрации 1·10 ^-4 M с гелем, дозирование на подложку и высушивание при 4-10°С, при этом активируют биомодуль раствором флавинмононуклеотида. Изобретение позволяет увеличить выход активности и максимальной интенсивности свечения биомодуля в 1,3-3 раза, увеличить время постоянного уровня свечения биомодуля до 2-20 минут, увеличить время хранения биомодуля без потери активности в 2 раза, повысить термостабильность и устойчивость биомодуля к химическим факторам среды. 2 н.п. ф-лы, 12 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к биокатализаторам на основе иммобилизованных клеток бактерий, и может быть использовано для получения иммобилизованного биокатализатора, предназначенного для определения различных токсикантов. Люминесцентный биокатализатор содержит иммобилизованные клетки светящихся бактерий, включенные в криогель на основе поливинилового спирта при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет увеличить продолжительность возможного использования биокатализатора, упросить его состав и технологию его производства. 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в различных аналитических системах, основанных на явлении биолюминесценции. Получен химерный фотобелок (фотин), представленный аминокислотной последовательностью белка обелина, часть которой (от остатка в положении 50 до остатка в положении 94) заменена гомологичным участком аминокислотной последовательности белка клитина (остатки 53-97), и отличающийся повышенным по сравнению с природным белком уровнем биолюминесценции. Описан способ получения нового химерного фотобелка методом рекомбинантных ДНК и применяемые для этого векторы и клетки. Предлагается использовать фотобелок по изобретению в качестве индикатора кальция в различных тест-системах in vitro и in vivo. 6 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Реагент для количественного определения аденозин-5'-трифосфата (АТФ) биолюминесцентным методом содержит люциферазу, выделенную из рекомбинантных клеток Е. coli, содержащих плазмиду pLR с нативным геном люциферазы светляков или люциферазу, выделенную из рекомбинантных клеток Е. coli, содержащих плазмиду с m-pLR с мутантным геном люциферазы Luciola migrelica, в котором остаток гистидина в положении 433 заменен на остаток тирозина, сульфат магния, смесь трис-(оксиметил)-аминометана и уксусной кислоты в качестве буферной смеси, смесь этиленаминотетраацетата натрия, дитиотреитола, бычьего сывороточного альбумина и трегалозы в качестве стабилизаторов и воду. При определении аденозин-5'-трифосфата реагент обеспечивает повышение чувствительности и воспроизводимости определения АТФ и снижение расхода фермента за счет увеличения удельной активности реагента. Реагент позволяет проводить определение аденозин-5'-трифосфата по интенсивности биолюминесценции при 560-570 нм при использовании нативной люциферазы светляков Luciola migrelica, и по интенсивности биолюминесценции при 606-610 нм при использовании люциферазы, в которой остаток гистидина в положении 433 заменен на остаток тирозина. 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано в медицине, экологии, фармацевтике и пищевой промышленности. Реагент для определения аденозин-5'-трифосфата представляет собой водный раствор люциферазы светляков, содержащий люциферин, сульфат магния, трис(оксиметиламинометан), уксусную кислоту, этилендиаминотетраацетат натрия, дитиотреитол, бычий сывороточный альбумин и стабилизатор, выбранный из группы, включающей полибрен, поливинилпирролидон, N-фталилхитозан и сахарозу. Применение изобретения позволяет повысить точность и воспроизводимость определения АТФ. 4 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для дифференцированного определения численности бактерий в смешанных культурах, которые имеют широкое распространение в природе: в воздухе, почве, водоемах, составе естественной микрофлоры высших организмов и среди контаминантов, вызывающих порчу различных объектов. В промышленности смешанные культуры находят широкое применение в различных отраслях пищевой (молочной, мясной, пивоваренной и др.) промышленности и других биотехнологических процессах (биологическая очистка сточных вод, биоремедиация почв, получение метана из отходов различных производств и др.). Способ предусматривает высев образцов смешанных культур в жидкие селективные питательные среды, определение биолюминесцентным методом численности клеток, накапливающихся в средах в ходе роста бактерий, и математическую обработку кинетических данных роста индивидуальных бактериальных культур, установление исходной концентрации бактерий, относящихся к разным таксономическим группам. Изобретение позволяет проведение одновременной количественной идентификации бактериальных клеток, относящихся к разным таксономическим группам и одновременно присутствующих в смешанных культурах, а также повысить точность определения численности клеток в широком концентрационном диапазоне и существенно сократить общее время анализа. 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биохимии, в частности к способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в химии, биохимии, медицине, гистологии, микробиологии, экологии и сельском хозяйстве для анализа веществ биолюминесцентным методом. В способе получения иммобилизованного многокомпонентного реагента для биолюминесцентного анализа, заключающемся в приготовлении 3-5% геля кипячением суспензии крахмала в фосфатном буфере, охлаждении геля до 24-30°С, смешивании буферного раствора биферментной системы светящихся бактерий НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза с гелем крахмала, дозировании на лавсановую пленку и высушивании при 4-10°С, согласно изобретению компоненты биферментной реакции вводят в крахмальный гель в следующем порядке: миристиновый альдегид, никотинамидадениндинуклеотид, биферментная система НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза и флавинмононуклеотид. При этом растворы субстратов никотинамидадениндинуклеотида, флавинмононуклеотида и миристинового альдегида готовят на фосфатном буфере рН 6,8-7,0. Изобретение обеспечивает улучшение качества реагента для биолюминесцентного анализа путем уменьшения количества необходимых компонентов реакционной смеси (с четырех до одного), сокращение времени анализа в два раза и увеличение точности измерений при необходимости проведения длительных анализов. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области генной и белковой инженерии и может быть использовано в биолюминесцентных анализах различного назначения. Получены новые мутантные формы люциферазы, характеризующиеся повышенной по сравнению с соответствующими ферментами дикого типа термостабильностью и в ряде случаев изменением длины волны испускаемого света. Все предложенные мутеины отличаются тем, что природный аминокислотный остаток в положении, соответствующем положению 357 в последовательности люциферазы Photinus pyralis, заменен другим, предпочтительно остатком незаряженной полярной аминокислоты, в частности тирозина. Приобретаемые мутантными люциферазами по изобретению новые свойства позволяют эффективно использовать их в качестве репортерного агента в различных аналитических системах. 6 с. и 17 з.п. ф-лы, 15 ил., 6 табл.